RNase 抑制剂 | 赛默飞 | Thermo Fisher Scientific

RNA 酶抑制剂是在实验中用于抑制 RNase 活性的重组酶。在 RNA 的酶反应过程中，通常使用 RNA 酶抑制剂作为减少和控制 RNase 污染的预防措施。少量的 RNase 可能与分离的 RNA 被共同纯化出来，从而影响下游实验应用的结果。RNase 污染也可能通过实验过程中所使用的吸头、反应管或其他试剂引入，这就是为什么在实验中考虑使用 RNA 酶抑制剂的重要原因，特别是在处理 RNA 样本时。

预防和控制 RNase 污染的基础知识如何处理 RNA 样本

什么是 RNA 酶抑制剂？

RNA 酶抑制剂是抑制 RNase 活性的重组酶。由于 RNase 在实验环境中无处不在，在皮肤上、空气中、徒手接触的任何东西、以及裸露于空气中的任何器物上均可能存在，因此尽力预防或避免 RNase 污染非常重要，可通过使用 RNA 酶抑制剂来实现。

需要使用多少量的 RNA 酶抑制剂？

RNA 酶抑制剂通常以酶活力单位出售，一个酶活力单位 (取决于您使用的 RNA 酶抑制剂) 通常定义为抑制 5 ng RNase A 所需的蛋白量。

针对不同的实验设计和 RNA 起始量，使用的 RNA 酶抑制剂的量将有所不同。首先需要进行一次快速计算以确定实验所需的酶量。备注：什么是酶活力单位？大多数酶和蛋白都是按照酶活力单位进行售卖。不仅要关注生产商的酶活力单位定义，更重要的是关注其酶活单位检测方法，可让您更好地了解该产品在特定实验应用中的作用。不幸的是，在大多数情况下，将已建立的酶活单位检测方法应用于您自己的实验时可能会导致出现一些问题，主要是因为酶活单位检测是设计用于量化该产品的特定功能。RNA 酶核酸酶抑制剂也存在同样的情况。

RNA 酶抑制剂的传统酶活单位检测方法是环状单磷酸苷 (CMP) 检测。虽然该检测方法确实证明了对 RNase A 的抑制，但有限的是它只提供了 RNA 降解的间接检测方法。因为 cCMP 是 RNase 的人工底物，其水解并不总是与实际 RNA 降解完全一致。此外，该检测方法仅可用于 RNase A 型核糖核酸酶及其抑制剂，因为 cCMP 不是其他核糖核酸酶的底物。

除此之外，一些生产商通过功能检测来定义酶活力单位，该功能检测可直接测量抑制剂阻断 RNA 降解的能力。在存在和不存在 RNA 酶抑制剂的情况下，将经放射性标记的 RNA 暴露于多种 RNase 中。在聚丙烯酰胺凝胶上分析结果以确定 RNA 降解被抑制的程度。此功能检测可直接提供抑制剂阻断 RNA 降解能力的信息。

核酸酶抑制剂的类型

核酸酶抑制剂包括 RNase 和 DNase 抑制剂。我们可提供多种核酸酶 (包括 DNase 和 RNase) 抑制剂：如 Invitrogen SUPERase•In RNase Inhibitor、RNaseOUT Recombinant Ribonuclease Inhibitor、RNAsecure RNase Inactivation Reagent 和 RNase Inhibitor (RI)。查看以下选择指南，了解哪种抑制剂或试剂适合您的研究：

	SUPERase•In RNase inhibitor	RNaseOUT recombinant ribonuclease inhibitor	RNAsecure RNase inactivation reagent	RNase Inhibitor (RI)	RNase Inhibitor (RI), cloned

描述	SUPERase•In™ RNA 酶抑制剂是一种非人源蛋白抑制剂，可非共价结合并抑制最常见的RNA酶，包括RNase A、RNase B、RNase C、RNase 1 和 RNase T1。	RNaseOUT 重组 RNA 酶抑制剂是 RNase A 等胰腺型核糖核酸酶的非竞争性抑制剂	RNAsecure RNase 灭活试剂是一种非酶试剂，可不可逆地将溶液中的 RNase 灭活。	RNase Inhibitor 是一种 50 kDa 的重组酶，用于抑制 RNase 活性。	该类 RNA 酶抑制剂是在大肠杆菌中生产的重组人蛋白，是胰腺型 RNase A 类酶的强效抑制剂。
可提供的规格	2,500 (20 U/μL) units 10,000 (20 U/μL) units	5,000 units	1 mL 10 mL	2,000 units (Applied Biosystems)	1,000 units (Invitrogen) 2,500 units (Ambion) 10,000 units (Ambion)

SUPERase • RNA 酶抑制剂，用于抑制 RNase A、B、C、1 和 T1

SUPERase•In™ RNA 酶抑制剂是一种非人源蛋白抑制剂，可非共价结合并抑制最常见的RNA酶，包括RNase A、RNase B、RNase C、RNase 1 和 RNase T1。SUPERase•In 可用于可能存在 RNase 污染问题的多种实验应用中。尤其对于体外转录和翻译、cDNA 合成、RT-PCR 以及 RNase-free 抗体的制备，SUPERase•In 是理想的选择。由于 SUPERase•In 相比传统 RNA 酶抑制剂可抑制更多种类的 RNA 酶，因此其为目前最高效的 RNA 酶抑制剂，对于 RNA 可提供更高水平的保护。SUPERase•In RNA 酶抑制剂的主要特点包括：

基于蛋白的强效 RNA 酶抑制剂
可以抑制 RNase A、B、C、1 和 T1
在较宽的条件范围内 (高达 65°C，pH 值范围为 5.5 – 8.5) 保持活性
无需 DTT，但在 DTT 浓度高达 200 mM 时仍有活性
在多次冻融后仍具有活性

Western blot of RNase activity labeled by 32P using SUPERase-IN RNase inhibitor versus placental RNase Inhibitor (RI) with the addition of different RNases: 50 pg RNase A, 50 pg RNase T1, 0.15 U TNase T1, and RNase Cocktail™ showing denser blots with SUPERase-IN RNase inhibitor, indicating higher RNase activity.

图 1.SUPERase•In 与胎盘核糖核酸酶抑制剂 (RI) 的比较。在指定核酸酶及 SUPERase•In 或 RI 存在情况下，将 ³²P 标记的 RNA 探针在 37°C 下孵育 30 分钟。SUPERase•In 和 RI 均以 1 U/µl 的浓度加入。信号存在表明 RNA 酶活性被抑制。

RNaseOUT RNA 酶抑制剂，可抑制 RNase A、B 和 C

RNaseOUT 重组核 RNA 酶抑制剂源于表达克隆猪肝脏基因的重组大肠杆菌菌株，经亲和色谱纯化得到。该抑制剂对胰腺型 RNase (如 RNase A) 具有很高的结合亲和力

基于蛋白的非竞争性重组 RNA 酶抑制剂
可抑制 RNase A、B 和 C

抑制 RNase A、B 和 C 的 RNAsecure 试剂

一般情况下，DEPC 被用于处理与 RNA 接触的溶液。但 DEPC 处理很费时，且可能有害，并且只能去除 DEPC 处理时存在的 RNase。而且有些溶液（例如含 Tris 等化合物的初级氨基酸）完全不能使用 DEPC 处理。除此之外，DEPC 处理后必须试用高压灭菌进行灭活，才能防止其干扰下游的酶促反应。使用 RNAsecure 试剂可避免这些问题：与 DEPC 不同，RNAsecure 几乎可用于任何溶液，且不需要处理后高压灭菌。RNAsecure 的一项独特功能是，在初始处理后重新加热将重新激活 RNase 去除试剂以去除任何新的污染物。