Arcturus® PicoPure® DNA 提取试剂盒

• 简化工作流程 — 简化基因组提取，生成可直接用于 PCR 的 DNA
• 高效提取 — 最大程度提高 DNA 回收率
• 灵活应用 — 提取适合任何 PCR 应用的 DNA
• 最大程度提高兼容性 — 可与大多数组织和细胞制备方法配合使用

借助 PicoPure® DNA 提取试剂盒，您可在同一支试管内提取和扩增 DNA，无需有机提取柱及离心柱，而且可以从少至10个通过激光捕获显微切割 (LCM) 技术制备的细胞或从几毫克组织中回收 DNA。PicoPure® DNA 提取试剂盒提供了采用便利包装的稳定蛋白酶 K、可与 PCR 兼容的 DNA 重组缓冲液和完整的用户指南。10等份冻干蛋白酶 K 均可新鲜复溶，制成 150 µL PicoPure® DNA 提取溶液 ― 足以进行150次 10 µL CapSure® HS LCM 盖提取或30次 50 µL CapSure® Macro LCM 盖提取（图1）。

图1.从至少10个激光捕获切割的细胞中多个单拷贝基因进行可重复性DNA提取和PCR扩增。通过人外周血白细胞离心涂片机对细胞进行显微切割，然后使用 10 µL PicoPure® DNA 提取溶液提取 DNA。使用三个单拷贝基因的引物直接在35次 PCR 循环中对提取物进行分析。

由于 DNA 不会因有机提取或离心柱而损耗，因此 PicoPure® 试剂盒能从少至10个细胞中实现可靠、可重现的 DNA 回收。PCR 研究印证了 PicoPure® 试剂盒的优势。直接在 PicoPure® 试剂盒缓冲液中将等量 DNA 转移到 PCR，或使用来自领先生产商的 DNA 提取试剂盒进行纯化后再转移。实时定量 PCR (qRT-PCR) 显示，与柱纯化的样本相比，PicoPure® 试剂盒处理的样本扩增较早（表明存在较多 DNA）并且扩增较一致（表明样本变异性较小）。PicoPure® 试剂盒具有可靠的高 DNA 回收率，在突变分析或基因分型测定中扩增来自小样本的单拷贝基因时，可提高检测灵敏度。高 DNA 回收率使该试剂盒非常适用于小样本，比如通过 LCM 制备的样本。

使用 PicoPure® 试剂盒提取的 DNA 可用于在同一支 0.5 mL 试管（即，用来提取 DNA 的那支）中进行的终点 PCR。对于基因拷贝数定量，可使用 StepOnePlus™ 实时 PCR 系统等平台通过 qRT-PCR 直接扩增来自极小样本的 DNA，无需进一步纯化。对于高灵敏度突变和基因型分析，可从小样本中提取并直接扩增 DNA，并且可使用 WAVE® System (Transgenomics) 等平台通过 dHPLC（变性高效液相色谱分析）分离基因片段（图2和3）。

		图2.通过实时 PCR 进行 PicoPure® DNA 提取和 Her2/neu 基因拷贝数定量。利用 LCM 技术从细胞涂片显微切割10、100和1,000个 SKBR3 细胞。使用 10 µL PicoPure® DNA 提取溶液提取 DNA，无需进一步纯化，然后将 10 µL 全用于 20 µL 实时 PCR 反应。确定每份样本的基因拷贝数，然后除以每份样本的细胞数，借此确定每个细胞的基因拷贝数。
点击图片放大		图3.PicoPure® DNA 提取溶液可用于终点 PCR 和使用 dHPLC 进行的扩增子检测。DNA 是使用 PicoPure® DNA 提取试剂盒从每份样本的10个外周血白细胞中提取的。此 DNA 未经进一步纯化即用于 PCR，以扩增 125 bp 人类 p53 基因片段和 245 bp 人类囊性纤维化病基因 (CFTR) 片段。随后分离 PCR 产物，并使用 dHPLC WAVE® System 进行检测。数据由加州圣地亚哥 Transgenomics, Inc. 的 Scott Hamlin 和 Nicolas Neckelmann 提供。

借助 PicoPure® DNA 提取试剂盒，研究人员可从通过各种方法制备的动物组织切片和细胞样本中成功回收基因组 DNA。*从福尔马林固定石蜡包埋 (FFPE) 组织切片、冷冻组织切片、乙醇固定细胞和细胞涂片均获得了出色的结果（图4）。

图4.用通过各种方法制备的 LCM 样本进行 PicoPure® DNA 提取和 β 珠蛋白基因扩增。使用下列方法制备用于 LCM 的细胞和组织样本。采用 LCM 技术来收集样本。使用 PicoPure® DNA 提取试剂盒提取 DNA，然后使用标准实验方案从每份样本中扩增一个单拷贝 536 bp 人类 β 珠蛋白片段，再在 10% 聚丙烯酰胺/TBE 凝胶上对产物进行电泳，之后用 SYBR® 金色核酸染色剂染色。M：DNA 标记物。泳道 1–3：乙醇固定的 SKBR3 细胞。泳道 4–6：FFPE 乳腺组织。泳道 7–9：冷冻、乙醇固定的包皮组织。泳道10：阳性 PCR 对照，1 ng 人类基因组 DNA 模板。泳道11：阴性对照，无 PCR 模板。