DNA 聚合酶 I

DNA 聚合酶 I 是具有 5´→3´ 和 3´→5´ 脱氧核糖核酸外切酶活性的 DNA 聚合酶。 DNA 聚合酶 I 可掺入生物素化的核苷酸。

应用： 依赖于 DNase I 的切口平移 (1,2)。 cDNA 克隆中的第二链合成 (3)。 填补 5´ 突出端 (4)。

来源： 纯化自表达质粒所带 DNA 聚合酶 I 基因的大肠杆菌。

性能和质量测试： 脱氧核糖核酸内切酶分析；确定依赖于 DNase I 的切口平移的效率。

单位定义： 一个单位的酶量可以在 37°C 的反应体系中，使用模板引物在 30 分钟内向酸沉淀材料掺入 10 nmol 总脱氧核糖核苷酸。

单位反应条件： 反应物共 100 μl，包括 50 mM 磷酸钾 (pH 7.0)、6.7 mM MgCl₂、1 mM 2-巯基乙醇、80 μg/ml 模板引物、32 μM dTTP、69 nM [³H]dTTP 和酶，温度为 37°C，时间 30 分钟。