Sulfo-SBED 生物素标记转移试剂盒 - Western 印迹应用

Thermo Scientific Pierce Sulfo-SBED 生物素标记转移试剂是一种多功能试剂，用于标记纯化蛋白，然后将连接的生物素标记共价转移至该蛋白的特定相互作用体上。

Sulfo-SBED 是磺基-N-羟基琥珀酰亚胺-2-(6-[生物素酰氨基]-2-(对-叠氮基苯甲酰氨基)-己酰氨基)乙基-1,3'-二硫代丙酸酯的缩写。它是一种异型双功能化学交联剂，能够一端与伯胺共价连接，另一端与几乎任何蛋白官能团共价连接。与典型交联剂不同，Sulfo-SBED 还包括生物素基团和可裂解的二硫化物间隔臂。这些特点相结合可使交联剂依次交联相互作用蛋白，并将生物素亲和标记从一种蛋白（即纯化“诱饵”蛋白）转移至另一种蛋白（可能是未知“猎物”蛋白）。标签转移是用于蛋白质相互作用研究的强大体外方法。越来越多的出版物描述使用 Sulfo-SBED 生物素标记转移试剂鉴别先前未知的蛋白相互作用结合配偶体以及更全面地表征其他蛋白相互作用的特定蛋白结合结构域的过程。

标记转移实验的典型方案：

•将几微升溶解的 Sulfo-SBED 试剂加入 0.5-1 mL 纯化诱饵蛋白的 PBS 溶液中。
•在冰上或室温下于暗处孵育混合物 30-120 分钟。
•进行脱盐或透析（在弱光下）以从标记诱饵蛋白中去除过量未反应的 Sulfo-SBED。
•将标记诱饵蛋白添加至细胞裂解物或其他包含假定靶蛋白相互作用体（“猎物”）的溶液中。
•当形成相互作用复合物时，将溶液暴露在紫外光 (365 nm) 下几分钟。
•通过以下几种方法之一分析产品：
•Western 印迹：裂解DTT 中的交联，通过 SDS-PAGE 分离蛋白，并通过 Western 印迹法使用辣根过氧化物酶标记的链霉素亲和素检测生物素化条带。
•纯化和质谱或测序：胰蛋白酶酶切后对生物素化蛋白或肽片段进行亲和纯化，并进行 MS 或测序以表征所涉及的蛋白。

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