GeneArt™ 高阶遗传组装系统

GeneArt® 高阶遗传组装系统是一种高效试剂盒，可用于同时且无缝地将多达 10 个 DNA 片段（总长度达 110 Kbp）组装至任何载体中。该系统依赖于酵母菌以高效率收集 DNA 片段并将其重组的能力。这大大减少了 DNA 的体外处理，无需酶处理（如限制性酶切和连接），同时还可精确融合 DNA 序列。该试剂盒含有来自酵母菌（无菌生长培养基）的进行转化和纯化的物质以及用于正确克隆的质粒扩增的感受态大肠杆菌。

•简单有效 — 可在单个载体内同时克隆多达10个 DNA 片段（总长度达 110 Kbp，含有您选择的序列）；无需限制性酶切、连接或重组位点
• 精确高效 — 旨在使您能够以所需的方向在所需的位点克隆所需的片段，克隆正确率高达 90%，并且不会留有额外序列
• 灵活性 — 可以使用我们的线性载体、您选择的载体，也可克隆无末端同源性的既有 DNA 片段，无需进一步修饰
• 免费工具 — 使用我们免费的网络界面设计 DNA 寡核苷酸等，该界面可逐步引导您完成整个项目
• 多种应用 — 通过快速组合、添加、删除或交换 DNA 片段来简化多种合成生物学和分子生物学技术

如要克隆1至4个大小有限的 DNA 片段，且如果您更喜欢采用体外方法，请考虑使用 GeneArt® 无缝克隆和组装试剂盒（货号 A13288）。

用多种 DNA 片段轻松创建新的特定构建体
GeneArt® 高阶遗传组装系统利用酵母菌（酿酒酵母菌）中的转化耦联重组 (TAR) 将既有 DNA 片段或化学合成的寡核苷酸连接至单个重组分子。基于共享末端同源性连接 DNA 片段和线性化载体。如果两个片段之间不存在这种末端同源性，则可以与重组连接体、合成 DNA 寡核苷酸（可提供两个不相关 DNA 片段之间的末端同源性）一起“拼接。该过程非常有效且无缝，组装后无额外序列。尽管曾有证据表明其支持长达 0.5 Mb、多达50个 DNA 片段，但本产品经过了优化，可在载体中克隆长达 110 Kb、多达10个 DNA 片段。

简单的克隆验证
为尽可能减少对酵母菌进行的操作，重组酵母菌克隆采用简化的10分钟 DNA 提取方案。提取步骤得到的组装分子量足以进行接合点的菌落 PCR 验证，以及对大肠杆菌细胞进行直接转化用于下游分析。试剂盒中包括提取所需的专有裂解缓冲液和玻璃微珠。为选择重组酵母菌克隆，我们提供了一种选择性酵母菌培养基试剂盒（Mav203 酵母细胞 CSM 培养基；货号 A13292）。

选择克隆载体的注意事项
GeneArt® 高阶遗传组装系统需要具有高容量且与酵母菌和大肠杆菌兼容的穿梭载体（即 BAC-YAC 穿梭载体）。本产品中不包括克隆载体，但我们单独提供了一种被称为 GeneArt® pYES1L Vector with Sapphire Technology™（货号 A13287）的即用型线性克隆载体。您也可以使用自己的载体，但它必须与高阶遗传组装系统兼容。这种兼容性可以通过我们的 GeneArt® 高阶载体转化盒（货号 A13291）轻松实现。

克隆效率
在 GeneArt® 高阶组装中，影响克隆效率的主要因素是 DNA 元件大小、不具有末端同源性的 DNA 数量、总最终分子大小以及片段质量和特异性。PCR 片段的末端（A 突出端或平末端）不影响克隆效率。

将不同数量具有末端同源性的片段组装至 GeneArt® pYES1L Vector with Sapphire Technology™ 的典型克隆效率如下：
• 对于5个 DNA 片段（各 10 Kb），>90%
• 对于10个 DNA 片段（各 5 Kb），>90%
• 对于10个 DNA 片段（各 10 Kb），>50%

通过“拼接”DNA 寡核苷酸将不具有末端同源性的既有片段组装至 GeneArt® pYES1L Vector with Sapphire Technology™ 的常见克隆效率如下：
• 对于1个片段 (10 Kb)，>90%
• 对于2个 DNA 片段（各 10 Kb），>75%

电脑模拟克隆设计
GeneArt® 高阶遗传组装中的一个关键步骤是正确设计具有适当同源性和间距的片段和寡核苷酸，以确保克隆成功组装。为简化和加快设计流程，我们提供了免费在线设计工具来帮助您通过电脑模拟设计实验。该工具可检查实验设计与产品规格的兼容性，设计用于 PCR 扩增或拼接不同克隆元件的 DNA 寡核苷酸，并向用户展示载体的图示以及与 Vector NTI® 软件兼容的 GenBank 格式的可下载注释序列。

应用
GeneArt® 高阶遗传组装系统设计用于在多种分子生物学和合成生物学应用以及其他应用中为克隆和 DNA 组装实验助力。该产品可用于创建带有可替换部分的模块化表达载体，还可用于执行在其他方面可能涉及多个步骤的多种任务。使用该试剂盒可以轻松：构建融合蛋白；删除、替换或添加 DNA 元件（如限制性位点）；克隆较大的不具有末端同源性的既有 DNA 片段；实现许多其他需要处理基因序列的技术。