GeneArt™ 高阶遗传组装系统，配有酵母菌生长培养基

GeneArt® 高阶遗传组装系统是一种高效试剂盒，可用于同时且无缝地将多达 10 个 DNA 片段（总长度达 110 Kbp）组装至任何载体中。该系统依赖于酵母菌以高效率收集 DNA 片段并将其重组的能力。这大大减少了 DNA 的体外处理，无需酶处理（如限制性酶切和连接），同时还可精确融合 DNA 序列。该试剂盒包含来自酵母菌（包括酵母菌选择性培养基）的进行转化和纯化的物质，和用于正确克隆的质粒扩增的感受态大肠杆菌。

•简单有效— 可在单个载体（长达 110 Kbp）内同时克隆多达 10 个 DNA 片段（含有您选择的序列）；无需限制性酶切、连接或重组位点
•精确高效— 旨在使您能够以您所需的方向在您所需的位点克隆您所需的片段，并且可获得高达 90% 的正确克隆，并且不会留有额外序列
•灵活性— 使用我们的线性载体、您选择的载体或者克隆预先存在的无末端同源性且无需进一步修饰的 DNA 片段
•免费工具— 使用我们可逐步引导您完成计划的免费网络界面设计 DNA 寡核苷酸等
•多种应用— 通过快速组合、添加、删除或交换 DNA 片段来简化多种合成生物学和分子生物学技术

对于限制大小的 1 至 4 个 DNA 片段的克隆，且如果您更喜欢体外方法，则请考虑使用 GeneArt® 无缝克隆和组装试剂盒（货号 A13288）。

轻松创建多种 DNA 片段的新特定构建体
GeneArt® 高阶遗传组装系统利用酵母菌（酿酒酵母菌）中的转化耦联重组 (TAR) 将预先存在的 DNA 片段或化学合成的寡核苷酸连接至单个重组分子。基于共享末端同源性连接 DNA 片段和线性化载体。如果两个片段之间不存在这种末端同源性，则可以与重组连接体、合成 DNA 寡核苷酸（可提供两个不相关 DNA 片段之间的末端同源性）一起“拼接。该过程非常有效且无缝，组装后无额外序列。尽管已有证据表明其支持多达 0.5 Mb 和 50 个 DNA 片段，但本产品经过优化，适用于载体中多达 110 Kb 和 10 个 DNA 片段的情况。

简单的克隆验证
为尽可能减少针对酵母菌所做的工作，重组酵母菌克隆采用简化的 10 分钟 DNA 提取方案。提取得到的组装分子量足以进行接合点的菌落 PCR 验证，以及对大肠杆菌细胞进行直接转化用于下游分析。试剂盒中包含了提取所需的专有裂解缓冲液和玻璃微珠。

选择克隆载体的注意事项
GeneArt® 高阶遗传组装系统需要具有高容量且与酵母菌和大肠杆菌兼容的穿梭载体（即 BAC-YAC 穿梭载体）。本产品中不包括克隆载体，但我们单独提供了一种被称为 GeneArt® pYES1L Vector with Sapphire Technology™（货号 A13287）的即用型线性克隆载体。您也可以使用自己的载体，但它必须与高阶遗传组装系统兼容。这种兼容性可以通过我们的 GeneArt® 高阶载体转化盒（货号 A13291）轻松实现。

克隆效率
在 GeneArt® 高阶组装中，影响克隆效率的主要因素是 DNA 元件大小、不具有末端同源性的 DNA 数量、总最终分子大小以及片段质量和特异性。PCR 片段的末端（A 突出端或平末端）不会影响克隆效率。

组装至 GeneArt® pYES1L Vector with Sapphire Technology™ 中的具有末端同源性的不同片段数量的典型克隆效率如下：
•对于 5 个 DNA 片段（各 10 Kb），>90%
• 对于 10 个 DNA 片段（各 5 Kb），>90%
• 对于 10 个 DNA 片段（各 10 Kb），>50%

使用 '拼接’ DNA 寡核苷酸组装至 GeneArt® pYES1L Vector with Sapphire Technology™ 中的不具有末端同源性的既有片段的常见克隆效率如下：
•对于 1 个片段 (10 Kb)，>90%
• 对于 2 个 DNA 片段（各 10 Kb），>75%

电脑模拟克隆设计
GeneArt® 高阶遗传组装中的一个关键步骤是具有适当同源性和间距的片段和寡核苷酸的正确设计，以确保克隆成功组装。为简化和加速设计流程，我们提供了一种免费在线工具来帮助您通过电脑模拟设计实验。该工具可检查实验设计与产品规格的兼容性，设计 DNA 寡核苷酸用于进行克隆的不同元件的 PCR 扩增或拼接，并向用户展示载体的图形表示以及与 Vector NTI® 软件兼容的 GenBank 格式的可下载注释序列。

应用
GeneArt® 高阶遗传组装系统设计用于在多种分子生物学和合成生物学等应用中进行克隆和 DNA 组装实验。该产品可用于创建带有可替换部分的模块化表达载体，还可用于执行在其他方面可能涉及多个步骤的多种任务。使用该试剂盒以简化：构建融合蛋白；删除、替换或添加 DNA 元件（如限制性位点）；克隆不具有末端同源性的较大预先存在的 DNA 片段；许多其他需要处理基因序列的技术。