GeneArt™ 无缝克隆和组装试剂盒

GeneArt™ 无缝克隆和组装试剂盒可在单次 30 分钟室温反应中将由任一序列组成的 1 至 4 个 PCR 片段同时定向克隆至任一线性化载体中。该试剂盒包含 DNA 片段组装以及将其转化至大肠杆菌以供重组载体选择和生长所需的所有试剂。

•快速容易—可在单个载体（长达 13 Kb）中同时克隆多达 4 个 DNA 片段（含有您选择的序列）；无需限制性酶切、连接或重组位点
•精确高效— 旨在使您能够以您所需的方向在您所需的位点克隆您所需的片段，并且可获得高达 90% 的正确克隆，并且不会留有额外序列
•载体灵活性— 使用我们的线性载体或您选择的载体
•免费工具— 使用我们可逐步引导您完成计划的免费网络界面设计 DNA 寡核苷酸等
•多种应用— 通过快速组合、添加、删除或交换 DNA 片段来简化多种合成生物学和分子生物学技术

对于超过 4 个 DNA 片段的克隆、最终分子大于 110 Kb 的情况或者使用的预先存在的 DNA 元件太长以致无法通过 PCR 进行扩增；请考虑使用 GeneArt™ 高阶遗传组装系统（货号 A13285）。

简单快速的克隆创建
GeneArt™ 无缝克隆是一种简单的两步流程，包括基于试管的组装反应以及随后转化至 One Shot™ 化学感受态 TOP10 大肠杆菌的过程。该试剂盒利用专有酶混合物的特性组装具有共享末端同源性的 DNA 片段，并且不会留下任何额外序列或痕迹（无缝）。然后，将组装反应的一部分转化至提供的感受态 TOP10 细胞中，从而生成可用于次日分析的克隆。通过使用定制 DNA 寡核苷酸进行 PCR 扩增可轻松设计所需的 15 个碱基对的末端同源性。

高效、灵活和精确的克隆
使用 GeneArt™ 无缝克隆和组装试剂盒时，影响克隆效率的主要因素是 DNA 元件大小（100 bp 至 5 Kb）、总最终分子大小 (≤ 13 Kb) 以及片段的质量和特异性。PCR 片段的末端（A 突出端或平末端）不会影响克隆效率。

克隆至 pUC19L 的不同片段数量的典型克隆效率如下所示：
•对于单个 5 Kb DNA 元件，90%
• 对于 4 个片段（各 1 Kb），70%
• 对于 4 个 DNA 片段（各 2 Kb），40%

克隆成功与否与插入片段序列和载体类型无关，您可以设计并添加几乎所有所需的序列或序列组合至任何质粒中，前提是质粒可通过限制性内切酶酶切或者 PCR 进行线性化。从反应中获得的环形克隆仅包含您的原始载体序列、插入片段和指定的同源性，无无关核苷酸插入。

电脑模拟克隆设计支持
GeneArt™ 无缝克隆中的一个关键步骤是具有适当同源性和间距的片段和寡核苷酸的正确设计，以帮助确保克隆成功组装。为简化和加速设计流程，我们提供了一种免费在线工具来帮助您通过电脑模拟设计实验。该工具可检查实验设计与产品规格的兼容性，设计具有末端同源性的 DNA 寡核苷酸用于进行克隆的不同元件的 PCR 扩增，并向用户展示载体的图形表示以及与 Vector NTI™ 软件兼容的 GenBank 格式的可下载注释序列。

应用
GeneArt™ 无缝克隆和组装试剂盒设计用于在多种分子生物学和合成生物学等应用中进行克隆和 DNA 组装实验。该产品可用于创建带有可替换部分的模块化表达载体，还可用于执行在其他方面可能涉及多个步骤的多种任务。使用试剂盒以简化：构建融合蛋白、在现有载体中删除、替换或添加 DNA 元件（如限制性位点）以及许多其他需要处理基因序列的技术。