像 Cells-to-CT™ 产品系列的其他产品一样,借助 Cells-to-CT™ 一步法 TaqMan™ 试剂盒,无需 RNA 纯化即可直接使用培养细胞进行表达分析。
该系列的这款新增产品包括 TaqMan™ 一步法 RT-PCR 预混液。RT-PCR 步骤的单管形式以空前的方式简化了“样品至结果”工作流程。将简单的 Cells-to-CT™ 裂解技术与一步法 RT-PCR 预混液的快速循环能力相结合,可以在有限的样品处理条件下更快地得到结果。
Cells-to-CT™ 一步法 TaqMan™ 试剂盒的特点为:
•全面 — 优化的工作流程包括去除 gDNA 的细胞裂解试剂和 TaqMan™ 一步法 RT-PCR 预混液
• 超快速度 — 7分钟样品制备,包括 DNase 处理,与28分钟的实时 RT-PCR 步骤相结合,可实现 ∼35 分钟的样品至结果工作流程
• 简单 — 总共10步(样品制备和实时 RT-PCR 结合)
• 稳健 — 可以对每份样品 10–100,000 个细胞进行基因表达分析;结果与从纯化 RNA 中获得的相当
• 便利 — 含有足够的试剂,可对制备的每份细胞样品进行5次实时 RT-PCR;这可让您研究多种靶标或进行重复的 RT-PCR
注释:单独出售 TaqMan™ 引物/探针对。
简单7分钟样品制备,然后准备进行实时 RT-PCR无论您使用的是孔板还是试管,Cells-to-CT™ 一步法 TaqMan™ 试剂盒均使用简单7分钟样品制备程序。该裂解技术专门设计用于 10–100,000 个培养细胞/样品。细胞先用 PBS 清洗,再于室温下置于裂解液中裂解5分钟,同时进行 DNase 处理。裂解过程在加入终止液,室温孵育2分钟后被终止。现在可以在实时 PCR 仪器上分析裂解物。只需将其添加到包含相关 TaqMan™ 引物/探针对的实时荧光定量 RT-PCR 预混液中。此外,裂解物也可以在 –20°C 下储存。由于样品直接在培养孔(96孔或384孔)里接受处理,样品处理错误、样品丢失可能性或转移错误极大程度减少,有利于快速高通量检测流程。与传统的多步骤 RNA 分离方案不同,无需加热、清洗或离心。该试剂盒大大简化了耗时费力的 30–60 分钟流程,将其缩短至7分钟。
经过验证的完整解决方案Cells-to-CT™ 一步法 TaqMan™ 试剂盒的所有组分均经过优化,具有一致且可靠的性能。这样可以消除不同样品制备和实时一步法 RT-PCR 预混液组装过程中的猜测。为了进一步保证质量,Cells-to-CT™ 一步法 TaqMan™ 试剂盒已通过 TaqMan™ 基因表达测定试剂盒进行了验证,其性能与通过纯化 RNA 获得的性能相当。
附属产品TaqMan™ Cells-to-CT™ 对照试剂盒设计与 TaqMan™ Cells-to-CT™ 产品配合使用。该试剂盒包含一个内源性对照 (ACTB),用于对样品装载可变性进行标准化,以及一个人工 XenoRNA™ 对照和相应的 TaqMan™ 基因表达测定,以监测 PCR 抑制的效果。