No-Stain™ 免染型蛋白标记试剂

Invitrogen No-Stain 蛋白标记试剂提供了一种灵活、准确、快速和可靠的方法，用于可视化和归一化凝胶或膜上的蛋白（转印后）。它在 10 分钟内与凝胶中或膜上的蛋白形成共价键，无需任何去染色步骤，并且可以使用任何常用的成像仪立即实现可视化。No-Stain 试剂不需要任何特定凝胶或其他试剂，并且与凝胶染色和 western 印迹工作流程兼容。

凝胶蛋白持续可视化
考马斯和其他凝胶染色及去染色步骤非常耗时且繁琐。No-Stain 蛋白标记试剂在 10 分钟内与凝胶中的所有蛋白上的赖氨酸氨基酸侧链形成共价键。由于赖氨酸是最丰富的氨基酸之一，No-Stain 试剂可检测凝胶或膜上的所有蛋白，并且从共价键合试剂发射出的强信号具有纳克级的灵敏度。

•替代传统凝胶染色试剂 — 能够在广泛的蛋白裂解液浓度范围 (1–80 µg) 内提供更准确的归一化
• 灵敏 — 检测下限为 20 ng/条带
• 特异性 — 仅与蛋白的赖氨酸侧链结合成键。未结合的试剂不会发射荧光，因此具有卓越信噪比
• 灵活—无需更换凝胶即可便利地进行无需染色的操作。No-Stain 试剂无需染色，可使用任何凝胶类型（预制或手灌胶）

获得用于定量 Western 印迹的金标准
蛋白归一化是获得可靠且可重现的定量 Western 印迹的关键步骤。总蛋白归一化被视为定量 Western 印迹的金标准。许多主流期刊已经制定了提交 Western 印迹研究的指南，指南中的相关引文展示如下。

•“为进行定量比较，应使用适当的试剂、对照品和具有线性信号转导范围的成像方法” – 性质
• “记录如何获得数据、信号强度是否与抗原上样呈线性关系以及如何归一化蛋白上样量” – Journal of Biological Chemistry
• “将信号强度归一化至总蛋白上样量（通过染色膜对总蛋白进行评估）（如果可能）” – Journal of Biological Chemistry
• “在没有证据证明操作步骤不会影响表达时不应使用管家蛋白” – Journal of Biological Chemistry

准确的上样对照应在所有实验条件下显示信号强度与样品上样量之间的线性关系。通过使用 No-Stain 试剂标记膜上总蛋白获得的信号强度，就可在所有实验条件下，确保与样品上样量呈线性关系（参见下图）。因此，在定量 Western 印迹应用中使用 No-Stain 试剂可以使用总蛋白作为理想上样对照。

•易于使用的方案 — 在 10 分钟内在硝酸纤维素或 PVDF 膜上标记蛋白
• 使用多种具有 UV 或荧光光源的成像仪快速可视化
• 准确的总蛋白归一化 — 1–80 μg 的蛋白检测宽线性范围能够检测到 No-Stain 信号以及靶蛋白的信号，以实现准确的总蛋白归一化
• 灵敏且稳定 — 纳克水平的灵敏度，稳定的信号与下游免疫检测步骤兼容
• 优越的分析 — 管家蛋白易受信号饱和与其他生物变化的影响，而在使用 No-Stain 试剂进行总蛋白归一化时不会观察到此类现象

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