PKA（蛋白激酶 A）比色活性试剂盒

仅供研究用 PKA 活性试剂盒是一种比色活性测定试剂盒，设计用于定量和检测细胞裂解物、组织提取物和缓冲液样品中蛋白酶 K 的活性。

这种完整的即用型试剂盒包括 PKA 底物包被的96孔板、PKA 标准品 (5,000 U)、磷酸化-PKA 底物抗体和用于进行测定的其他组分。使用本试剂盒时需要使用能够读取 450 nm 和 650 nm 处光密度的96孔微孔板读数仪。

性能特性
• 测定类型：比色活性试剂盒
• 样品类型：细胞裂解物、组织提取物、缓冲液样品
• 灵敏度：0.366 U/mL
• 标准曲线范围：5–25 U/mL
• 反应性：与物种无关

背景
PKA 是一类重要的激酶成员，称为 Arg 定向激酶或 AGC 家族激酶，其包括 cAMP 依赖型蛋白激酶（PKA 或 cAPK）、cGMP 依赖型蛋白激酶 (PKG)、蛋白激酶 C、Akt 和 RSK。这些激酶具有底物特异性，其特征是在相对于磷酸化丝氨酸或苏氨酸的位置3处具有 Arg。第二信使环状 AMP (cAMP) 会激活哺乳动物细胞中的 PKA 并控制许多细胞机制，如基因转录、离子转运和蛋白磷酸化2。非活性 PKA 是一种异源四聚体，由一个调节亚基 (R) 二聚体和一个催化亚基 (C) 二聚体组成。在这种非活性状态下，R 亚基上的伪底物序列会封闭 C 亚基上的活性位点。PKA 与 Akt (PKB) 以及 PKC 具有相同的底物特异性。存在此共有序列并被 PKA 磷酸化的底物有 Bad (Ser155)、CREB (Ser133) 和 GSK-3。

PKA 与许多细胞过程有关，包括调节其他蛋白激酶、调节细胞内钙浓度以及转录调控。cAMP 的增加通过激活 cAMP 反应元件结合蛋白 (CREB)、cAMP 反应元件调节因子 (CREM) 和转录激活因子1 (ATF1) 而引起转录反应。其中每种转录因子都含有一个激酶诱导结构域，该结构域包含 PKA 磷酸化的保守位点。

测定原理
该 PKA 活性试剂盒设计用于定量测量多种样品中的 PKA 活性。提供重组 PKA 标准品用于为测定生成标准曲线，所有样品均应从标准曲线中读取。该试剂盒利用与微量滴定板结合的固定化 PKA 底物。存在所提供的 ATP 时，含有 PKA 的样品将使固定化 PKA 底物发生磷酸化。孵育90分钟，然后洗涤，磷酸化 PKA 底物的特异性兔抗体与修饰的固定化底物结合。此外、在孔板中还添加了对用过氧化物酶标记的兔 IgG 具有特异性的抗体，以与兔抗磷酸化 PKA 底物结合。短暂的孵育和清洗后，添加底物，显色强度与样品和标准品中 PKA 的数量成正比。

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