EasySelect™ 毕赤酵母表达试剂盒

EasySelect™毕赤酵母表达试剂盒提供酵母菌毕赤酵母中蛋白生产所需的所有组成部分。EasySelect™ 试剂盒含有毕赤酵母菌株、表达载体和能够转化毕赤酵母细胞的试剂。使用 Zeocin™ 抗生素进行选择可轻松筛选高拷贝数转化变体。

毕赤酵母表达系统的优势：
•使得毕赤酵母细胞的培养如同大肠杆菌一样简单
•获得优于其他微生物表达系统的细胞密度。
•每个细胞生成的蛋白多于其他微生物表达系统。
•从真核蛋白加工、蛋白折叠和翻译后修饰中受益。
•易于从摇瓶发酵扩展到工业规模的发酵。

成熟的蛋白表达系统
在过去的 30 年里，毕赤酵母被世界各地的实验室和行业用于生产许多物种（包括人）的数百种不同蛋白（参考文献 1、2、3）。毕赤酵母可像细菌（大肠杆菌）或酵母菌（酿酒酵母）一样易于生长，且可提供超出这些系统的许多优势（参考文献 4）。毕赤酵母可生长至远远高于细菌或其他酵母菌的细胞密度。毕赤酵母能够以甲醇为单一碳源进行生长，使其规模扩大至工业水平的成本相对低廉。

AOX1 启动子的作用
EasySelect™毕赤酵母表达试剂盒采用来自毕赤酵母醇氧化酶 1 (AOX1) 基因的启动子来启动蛋白的生产。毕赤酵母能够以甲醇为单一碳源进行生长。以甲醇为单一碳源生长时，AOX1 mRNA 最多可占总 mRNA 的 5%，而 AOX1 酶最多可占细胞重量的 30%（参考文献 5）。

EasySelect™毕赤酵母表达系统随附 pPICZ 和 pPICZα 载体。pPICZ 和 pPICZα 载体包含一个多克隆位点 (MCS)，可在 AOX1 启动子的控制下插入您的目标基因。pPICZ 和 pPICZα 载体还含有 c-Myc 标签（便于检测）和多聚组氨酸 (6xHis) 标签（便于检测和纯化蛋白）。

由于毕赤酵母自然分泌少量蛋白，可以使用 pPICZα 载体中的细胞外信号转导序列促使目标蛋白分泌至培养基中，以简化下游纯化。

获得整合 Zeocin™ 抗生素的高拷贝数
EasySelect™毕赤酵母表达试剂盒采用 Zeocin™ 抗生素选择转化的毕赤酵母细胞。pPICZ 和 pPICZα 载体含有来自印度斯坦链异壁菌 (Sh ble) 的博来霉素基因，可获得对 Zeocin™ 抗生素的耐药性。pPICZ 和 pPICZα 载体可稳定整合至毕赤酵母基因组中。通过增加 Zeocin™ 抗生素的浓度，您可以轻松选择具有较高整合数量和较高蛋白表达水平的克隆。

EasySelect™毕赤酵母表达试剂盒包含以下组成部分：
•毕赤酵母和大肠杆菌拭子瓶菌株，用于启动培养。
•用于制备可转化的毕赤酵母细胞的溶液。
•用于将目标基因与 AOX1 启动子融合的 pPICZ 和 pPICZα 载体。
•用于确认基因已插入 pPICZ 载体的测序引物。
•用于选择转化的毕赤酵母细胞的 Zeocin™ 抗生素。

仅供研究使用。不适用于诊断程序。

相关链接
•查看 pPICZ A、B、C 载体的产品插页 (PDF)。
•查看 pPICZα A、B、C 载体的产品插页 (PDF)。
•查看 Zeocin™ 抗生素的产品插页 (PDF)。
•查看 Invitrogen 提供的毕赤酵母方案第 1 版，了解有关使用毕赤酵母的更多信息。
•了解有关 Invitrogen 其他毕赤酵母表达系统的更多信息。

参考文献

1.Cereghino JL, Cregg JM.Heterologous protein expression in the methylotrophic yeast Pichia pastoris.FEMS Microbiol Rev. 2000 Jan;24(1):45-66.[PubMed]
2.Cereghino GP, Cereghino JL, Ilgen C, Cregg JM.Production of recombinant proteins in fermenter cultures of the yeast Pichia pastoris.Curr Opin Biotechnol.2002 Aug;13(4):329-32.[PubMed]
3.Cregg JM.简介：毕赤酵母与其他表达系统的区别。Methods Mol Biol.2007;389:1-10.[PubMed]
4.Cregg JM, Tolstorukov I, Kusari A, Sunga J, Madden K, Chappell T. 酵母菌毕赤酵母中的表达。Methods Enzymol.2009;463:169-89.[PubMed]
5.Cregg JM, Madden KR, Barringer KJ, Thill GP, Stillman CA.酵母菌毕赤酵母两个酒精氧化酶基因的功能鉴定。Mol Cell Biol.1989 Mar;9(3):1316-23.[PubMed]