多拷贝毕赤酵母表达试剂盒

多拷贝毕赤酵母表达试剂盒含有 pPIC3.5K、pPIC9K 和 pAO815 载体，用于生产和选择含有一个以上目标基因拷贝的毕赤酵母菌株。在许多情况下，拷贝数增加导致表达水平增加。

pPIC9K 和 pPIC3.5K
pPIC9K 和 pPIC3.5K 载体携带卡那霉素抗性基因，使毕赤酵母对 Geneticin™ 试剂产生抗性。可通过对 Geneticin™试剂水平升高产生的耐药性鉴别多个插入事件的自然发生。在组氨酸缺陷型培养基上选择毕赤酵母转化体，并筛选其对 Geneticin™试剂的耐药性水平。能够在高浓度 Geneticin™ 中生长表明多个拷贝的卡那霉素抗性基因和目标基因已整合到基因组 (1) 中。pPIC9K 载体可引导表达蛋白的分泌，而 pPIC3.5K 表达的蛋白留在细胞内。

pAO815
pAO815 是一种毕赤酵母表达载体，设计用于将一个基因的多个拷贝克隆至单一载体中。载体包含 5´AOX1 基因上游的 Bgl II 位点和 3´AOX1 转录终止 (TT) 信号下游的独特 BamH I 位点。需要四个步骤以生成目标基因的多个拷贝：
1.将基因克隆至载体中的独特 EcoR I 位点。
2.用 BamH I 和 Bgl II 酶切构建体，释放含有 AOX1 启动子、目标基因和 3´AOX1 TT 的“表达盒”。
3.通过体外连接生成表达盒的多连体。
4.将多个拷贝重新插入 pAO815 载体并转化至毕赤酵母中。

这些载体也可单独购买。