以下是为您提供的一些建议：

•许多酶，包括限制性内切酶和连接酶，可被少量琼脂糖和高氯酸盐污染物抑制。正常情况下，这并不会对实验造成影响。但是，如果出现这样的问题，您可使用未经再纯化的DNA，通过增加消化或连接过程中酶的用量或通过延长消化或连接的孵育时间优化实验。另外，也可以在使用相同的反应体系和相同用量的限制性内切酶的情况下，减少消化或连接反应的DNA量。
•洗脱片段中可能有残留乙醇。一定要完全离心以去除洗涤缓冲液并丢弃，使用新试管收集洗脱的DNA。在对乙醇非常敏感的应用中，应将吸附柱打开后，在室温下直立放置15分钟，使多余的乙醇挥发。
•洗涤步骤可能未达到理想效果。在这种情况下，洗脱液中可能含有痕量高氯酸盐。为避免这种情况发生，可将离心时间延长至5分钟，并使用洗涤缓冲液洗2次。
•如果您使用了高浓度琼脂糖或向柱子中加入超过250 mg琼脂糖，应确保执行备选的洗涤步骤（可参考QC protocol）。在对EDTA敏感的应用中，应使用水（pH 7.5–8.5）或无EDTA的10 mM Tris（pH 8.0）洗脱。

限制性内切酶缓冲液