内体结构

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Schematic of cell structure with expanded view of an endosome

内体结构是细胞内参与细胞内蛋白质转运的分选细胞器。我们将在本文描述可用于鉴定活细胞中早期和晚期内体的荧光融合蛋白。

本页内容：

内体简介
内体染色的选择指南
早期和晚期内体染色

内体简介

内体是细胞内分选细胞器，可从高尔基体[1]中转运蛋白质和脂质等亚细胞组分。蛋白质还在内吞作用、胞饮作用和吞噬作用的过程中通过质膜内化 [1]。在此处了解有关这些过程的更多信息。内体根据细胞组分内化后的阶段可分为早期或晚期。它们的形态和 Rab 标志物也可区分。早期内体通常在质膜附近形成，通过 Rab5A 标记物加以区分。晚期内体比早期内体成熟，通过 Rab7A 标志物加以区分。

内体染色的选择指南

	早期内体染色		晚期内体染色
名称	CellLight 早期内体 GFP	CellLight 早期内体 RFP	CellLight 晚期内体 GFP	CellLight 晚期内体 RFP
结果	靶向内吞过程特定阶段的荧光蛋白稳定信号
测量范围	早期内体		晚期内体
常用滤光片组	FITC	TRITC	FITC	TRITC
标记	GFP	RFP	GFP	RFP
Ex/Em (nm)	488/510	555/584	488/510	555/584
信噪比
光稳定性
多色标记	是
活细胞	是
固定细胞	否
可固定	是
产品规格	1 mL	1 mL	1 mL	1 mL
货号	C10586	C10587	C10588	C10589

早期和晚期内体荧光蛋白

CellLight 荧光融合蛋白为在活细胞中标记内体的即用构建体，以示踪内体在细胞内的行为动态。CellLight 早期内体标签使用与 emGFP（图 1）或 TagRFP（图 2）融合的 Rab5a 构建体，而 CellLight 晚期内体标签使用与 emGFP（图 3）或 TagRFP（图 4）融合的 Rab7a 构建体。

使用 CellLight 荧光融合蛋白涉及使用 BacMam 技术进行简单的转染步骤，且与细胞染料一样几乎无毒性无化学破坏性。内体融合蛋白可与其他荧光探针在多重分析中一起标记活细胞或甲醛固定后细胞以进行共定位研究。

早期内体图像

Microscopic image of cell stained with green endosomes, red peroxisomes, blue lysosomes, and magenta nucleus

图 1使用 LysoTracker Deep Red 实现早期内体 GFP 共定位。将表达 CellLight 过氧化物酶体 RFP 和 CellLight 早期内体 GFP 的 HeLa 细胞与 LysoTracker Deep Red 和 Hoechst 33342 一起上样。图像伪色设置为 Hoechst 33342（洋红色）、LysoTracker Deep Red（蓝色）、CellLight 早期内体 GFP（绿色）和 CellLight 过氧化物酶体 RFP（红色）。

Microscopic image of cells stained with red endosomes, green mitochondria, and blue nuclei

图 2早期内体 RFP 和线粒体 GFP。使用 CellLight 内体 RFP 和线粒体 GFP 转导 HeLa 细胞，然后共染色 Hoechst 33342。使用 DeltaVision Core 显微镜和标准 DAPI/FITC/TRITC 滤光片组合进行活细胞成像。

晚期内体图像

Microscopic image of cells stained with green endosomes, red Golgi, and magenta mitochondria

图 3晚期内体 GFP 和高尔基体 RFP。将 A549 细胞与 CellLight 晚期内体 GFP 和 CellLight 高尔基体 RFP 共转导，然后孵育过夜。使用 MitoTracker Deep Red 染色后，细胞在 Zeiss LSM 共聚焦显微镜上成像。

Microscopic image of cells stained with red endosomes, green tubulin, blue lysosomes, and magenta nuclei

图 4使用 LysoTracker Deep Red 对晚期内体 RFP 共定位。将表达 CellLight 微管蛋白 GFP 和 CellLight 晚期内体 RFP 的 HeLa 细胞与 LysoTracker Deep Red 和 Hoechst 33342 一起上样。图像伪彩处理为 Hoechst 33342（品红色），LysoTracker Deep Red（蓝色），CellLight Tubuler-GFP（绿色）和 CellLight 晚期内体 RFP（红色）。

了解更多有关内体染色的信息

参考文献：

Otegui M and Reyes FC (2010).Nature Education.3(9):23.

资源

Molecular Probes手册

BioProbes 70 期刊文章

焦点文章——深入探究用于细胞器标记的荧光染料

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