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蛋白质的产生和破坏的独立机制在细胞内共同发挥作用以维持平衡或体内平衡。以空间和时间维度标记新合成的蛋白，以在疾病和实验模型中研究蛋白质平衡及破坏的作用。Click-iT Plus 技术提供了一种用一系列荧光标记新生蛋白质的方法，并提供了使用脉冲追踪型实验对合成和降解进行时间研究的机会。用荧光标记物标记的蛋白也可以通过自噬途径进行追踪，并可与 LC3B，p62 或其他自噬标记联用，以研究蛋白质降解过程。
Click-iT 技术也可用于研究蛋白质修饰，如糖基化和脂肪酸附着。荧光标签的种类和反应条件的多样性使得新生蛋白质标记能够与其他细胞检测方法搭配使用，包括荧光蛋白法。
本页内容：
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蛋白质分析选择指南
| 靶标 | 名称 | Tag（标签） | 规格 | 货号 |
|---|---|---|---|---|
| 新生蛋白质 | Click-iT AHA（L-叠氮基高丙氨酸） | 叠氮化物 | 5 mg | C10102 |
| Click-iT HPG (L-高炔丙基甘氨酸) | 炔烃 | 5 mg | C10186 | |
| OPP (O-炔丙基-嘌呤霉素) | 炔烃 | 5 mg | C10459 | |
| 杂戊二烯基化蛋白质 | Click-iT 香叶酰香叶醇 | 叠氮化物 | 5 mg | C10249 |
| 岩藻糖基化聚糖 | Click-IT 岩藻糖炔烃 | 炔烃 | 5 mg | C10264 |
| 棕榈酰化蛋白 | Click-iT 棕榈酸，叠氮化物 | 叠氮化物 | 1 mg | C10265 |
| 肌动蛋白 - 酰化蛋白 | 肉豆蔻酸，叠氮化物 | 叠氮化物 | 1 mg | C10268 |
| O-连接糖蛋白 | Click-iT GalNAz (四乙酰化 N- 叠氮基乙酰基乙酰基氨基半乳糖) | 叠氮化物 | 1支 | C33365 |
| 唾液酸修饰的糖蛋白 | Click-iT ManNAz (四乙酰化 N-叠氮基乙酰基-D-甘露糖胺 | 叠氮化物 | 1支 | C33366 |
| O-GlcNAz 修饰糖蛋白 | Click-IT GlcNAz (四乙酰化 N-叠氮基乙酰基乙酰基氨基葡糖) | 叠氮化物 | 1支 | C33367 |
Click-iT AHA 套件和工具
检测和表征新合成的蛋白质或因疾病、药物治疗或环境变化导致的蛋白质表达变化是细胞毒性检测中重要的一环。Click-iT AHA 技术为检测新生蛋白质合成提供了一种快速、灵敏、无毒且无放射性的方法，可利用荧光显微镜、流式细胞术和高内涵筛选 (HCS) 进行检测。Click-iT AHA 也可用于新生蛋白质捕获，并可在电泳凝胶和蛋白质免疫印迹中与蛋白质分析检测试剂盒一起使用。
- 针对 HCS 优化的试剂盒
- 适用于多个平台的灵活工具
- 使用 Click-iT HPG 进行多重检测
图1.剂量响应曲线。U2OS细胞在无L-甲硫氨酸的培养基中处理，并用 50 μM Click-iT AHA 处理30分钟，同时加入茴香霉素（17 pM–1 μM）、环己酮（85 pM–5 μM）或普洛霉素（1.7 nM–100 μM）。清洗、固定、渗透后的细胞，与 Alexa Fluor® 488 炔进行点击反应后，检测新生蛋白质的合成。使用 Thermo Fisher Scientific Cellomics® ArrayScan® VTI 平台进行成像和分析。
追踪翻译后修饰
用于标记新生蛋白质合成的 Click-iT 工具包括用于检测一系列翻译后修饰（包括脂肪酸附着和糖基化）的标记物。使用含有炔烃的生物分子饲养细胞或动物，炔烃主动掺入蛋白质内。
图2. 使用 Click-iT GalNAz 糖蛋白标记试剂对四吡啶甲基化进行染色。使用 Image-iT 固定/渗透试剂盒进行固定和透化后，使用 Alexa Fluor 488 叠氮化物标记了 EdU 合成的 DNA，用 Alexa Fluor 555 炔烃 标记了GalNAz 合成的细胞组分。
| 产品 | Click-iT HPG Alexa Fluor 488 蛋白合成检测试剂盒 | Click-iT HPG Alexa Fluor 594 蛋白合成检测试剂盒 | Click-iT Plus OPP Alexa Fluor 488 蛋白合成检测试剂盒 | Click-iT Plus OPP Alexa Fluor 594 蛋白合成检测试剂盒 | Click-iT Plus OPP Alexa Fluor 647 蛋白合成检测试剂盒 | ||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 靶标 | |||||||
| 检测原理 | |||||||
| 荧光染料 | Alexa Fluor 488 | Alexa Fluor 594 | Alexa Fluor 488 | Alexa Fluor 594 | Alexa Fluor 647 | ||
| 标准滤光片组 | FITC | Texas Red | FITC | Texas Red | Cy®5 | ||
| 激发/发射波长(nm) | 495/519 | 590/617 | 495/519 | 590/617 | 650/670 | ||
| 信噪比 |  | |  | | | ||
| 光稳定性 |  | | | | | ||
| 多色标记 | 与抗体标记和常见细胞或组织染色方法兼容 | 可保留荧光蛋白的信号，适用于体内标记 | |||||
| 样品类型 | 针对培养细胞进行了优化 | 无洗涤方案；试剂可以直接加入培养基中 | |||||
| 规格 | 25个盖玻片/ 2个板 | 25个盖玻片/ 2个板 | 25个盖玻片/ 2个板 | 25个盖玻片/ 2个板 | 25个盖玻片/ 2个板 | ||
| 货号 | C10428 | C10429 | C10456 | C10457 | C10458 | ||
用于蛋白质稳态的 Click-iT HPG 试剂盒
Click-iT HPG Alexa Fluor 蛋白合成检测试剂盒提供了一种快速、灵敏、无毒的非放射性方法，采用荧光显微镜、高内涵成像或流式细胞仪检测新生蛋白合成。L-高炔丙基甘氨酸 (HPG，蛋氨酸的氨基酸类似物，含有炔基) 被添加到培养的细胞中，并在活性蛋白质合成过程中掺入蛋白质内。添加 Alexa Fluor 叠氮化物致使绿色荧光叠氮化物与炔基发生化学选择性连接或"点击"反应，从而通过成像分析检测修饰蛋白。
- 针对培养细胞进行了优化
- 蛋白质合成的定量测量
- 使用 Click-iT AHA 进行多重检测
Click-iT HPG Alexa Fluor 488 蛋白合成测定试剂盒可与 Click-iT AHA 和 Alexa Fluor 594 炔烃配合使用，用于新生蛋白合成差异的空间或时间测定。
图3.使用 Click-iT HPG 监测具有结构无关分子的蛋白合成的抑制。使用 Click-iT HPG Alexa Fluor 488 蛋白合成测定试剂盒，使用 2 种药物和 3 种不同细胞类型监测剂量依赖性下降。
以 Click-iT OPP 进行快速且灵敏的检测
Click-iT Plus OPP Alexa Fluor 蛋白合成检测试剂盒提供快速、灵敏和无放射性的方法，可用于使用荧光显微镜、高内涵成像或流式细胞分析进行蛋白质合成检测。在该测定中，O-炔丙基-嘌呤霉素 (OPP) 可在完全含蛋氨酸培养基中有效掺入新翻译的蛋白中并在快速、高特异性和温和点击反应中荧光标记明亮、光稳定的 Alexa Fluor 染料。
- 可在完全培养基中工作
- 保留荧光蛋白的信号
- 适用于体内标记
图4. 用于标记新生蛋白合成 (细胞核内显示为蓝色点状荧光)的 Click-iT Plus OPP Alexa Fluor 647 蛋白合成检测试剂盒。Talin-GFP 融合蛋白显示为绿色，F-肌动蛋白染色 显示为红色。
| 产品 | Click-iT AHA Alexa Fluor 488 蛋白合成检测试剂盒 |
|---|---|
| 靶标 | 新生蛋白合成 |
| 检测原理 | 蛋白在合成过程中被荧光标记物以"点击"化学反应原理标记 |
| 荧光染料 | Alexa Fluor 488 |
| 标准滤光片 | FITC |
| 激发/发射波长(nm) | 495/519 |
| 信噪比 |  |
| 光稳定性 |  |
| 多色标记 | 与抗体标记和常见细胞或组织染色方法兼容 |
| 样品类型 | 针对 HCS 测定进行了优化 |
| 规格 | 2 个板 |
| 货号 | C10289 |
用于蛋白质合成的 Click-iT AHA 试剂盒
Click-iT AHA Alexa Fluor 488 蛋白质合成 HCS 检测试剂盒为检测新生蛋白质合成提供了一种快速、灵敏、无毒，且无放射性的方法，可利用荧光显微镜和高通量成像进行检测。将 Click-iT AHA 添加至培养的细胞中，氨基酸在活性蛋白质合成过程中掺入蛋白质内。对掺入的氨基酸进行的检测利用了叠氮化物和炔烃之间的化学选择性连接或“click”反应，使用 Alexa Fluor 488 炔烃检测经过叠氮基修饰的蛋白质。
点击放大图片
图 5.剂量响应曲线。U-2 OS 细胞在无L-甲硫氨酸的培养基中处理，并用 50 μM Click-iT AHA 处理30分钟，同时加入茴香霉素（17 pM–1 μM）、环己酮（85 pM–5 μM）或普洛霉素（1.7 nM–100 μM）。清洗、固定、渗透后的细胞，与 Alexa 荧光剂 488 炔进行点击反应后，检测新生蛋白质的合成。使用 Thermo Fisher Scientific Cellomics ArrayScan VTI 平台进行成像和分析。
| 产品 | Click-iT 蛋白质富集试剂盒用于叠氮化物修饰蛋白质的点击化学捕获 |
|---|---|
| 靶标 | 新生蛋白合成 |
| 检测原理 | "点击"化学在合成过程中标记蛋白质以进行捕获 |
| 规格 | 离心柱 |
| 货号 | C10416 |
| 靶标 | 名称 | Tag（标签） | 规格 | 货号 |
|---|---|---|---|---|
| 新生蛋白质 | Click-iT AHA（L-叠氮基高丙氨酸） | 叠氮化物 | 5 mg | C10102 |
| Click-iT HPG (L-高炔丙基甘氨酸) | 炔烃 | 5 mg | C10186 | |
| OPP (O-炔丙基-嘌呤霉素) | 炔烃 | 5 mg | C10459 | |
| 杂戊二烯基化蛋白质 | Click-iT 香叶酰香叶醇 | 叠氮化物 | 5 mg | C10249 |
| 岩藻糖基化聚糖 | Click-IT 岩藻糖炔烃 | 炔烃 | 5 mg | C10264 |
| 棕榈酰化蛋白 | Click-iT 棕榈酸，叠氮化物 | 叠氮化物 | 1 mg | C10265 |
| 肌动蛋白 - 酰化蛋白 | 肉豆蔻酸，叠氮化物 | 叠氮化物 | 1 mg | C10268 |
| O-连接糖蛋白 | Click-iT GalNAz (四乙酰化 N- 叠氮基乙酰基乙酰基氨基半乳糖) | 叠氮化物 | 1支 | C33365 |
| 唾液酸修饰的糖蛋白 | Click-iT ManNAz (四乙酰化 N-叠氮基乙酰基-D-甘露糖胺 | 叠氮化物 | 1支 | C33366 |
| O-GlcNAz 修饰糖蛋白 | Click-IT GlcNAz (四乙酰化 N-叠氮基乙酰基乙酰基氨基葡糖) | 叠氮化物 | 1支 | C33367 |
Click-iT AHA 套件和工具
检测和表征新合成的蛋白质或因疾病、药物治疗或环境变化导致的蛋白质表达变化是细胞毒性检测中重要的一环。Click-iT AHA 技术为检测新生蛋白质合成提供了一种快速、灵敏、无毒且无放射性的方法，可利用荧光显微镜、流式细胞术和高内涵筛选 (HCS) 进行检测。Click-iT AHA 也可用于新生蛋白质捕获，并可在电泳凝胶和蛋白质免疫印迹中与蛋白质分析检测试剂盒一起使用。
- 针对 HCS 优化的试剂盒
- 适用于多个平台的灵活工具
- 使用 Click-iT HPG 进行多重检测
图1.剂量响应曲线。U2OS细胞在无L-甲硫氨酸的培养基中处理，并用 50 μM Click-iT AHA 处理30分钟，同时加入茴香霉素（17 pM–1 μM）、环己酮（85 pM–5 μM）或普洛霉素（1.7 nM–100 μM）。清洗、固定、渗透后的细胞，与 Alexa Fluor® 488 炔进行点击反应后，检测新生蛋白质的合成。使用 Thermo Fisher Scientific Cellomics® ArrayScan® VTI 平台进行成像和分析。
追踪翻译后修饰
用于标记新生蛋白质合成的 Click-iT 工具包括用于检测一系列翻译后修饰（包括脂肪酸附着和糖基化）的标记物。使用含有炔烃的生物分子饲养细胞或动物，炔烃主动掺入蛋白质内。
图2. 使用 Click-iT GalNAz 糖蛋白标记试剂对四吡啶甲基化进行染色。使用 Image-iT 固定/渗透试剂盒进行固定和透化后，使用 Alexa Fluor 488 叠氮化物标记了 EdU 合成的 DNA，用 Alexa Fluor 555 炔烃 标记了GalNAz 合成的细胞组分。
| 产品 | Click-iT HPG Alexa Fluor 488 蛋白合成检测试剂盒 | Click-iT HPG Alexa Fluor 594 蛋白合成检测试剂盒 | Click-iT Plus OPP Alexa Fluor 488 蛋白合成检测试剂盒 | Click-iT Plus OPP Alexa Fluor 594 蛋白合成检测试剂盒 | Click-iT Plus OPP Alexa Fluor 647 蛋白合成检测试剂盒 | ||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 靶标 | |||||||
| 检测原理 | |||||||
| 荧光染料 | Alexa Fluor 488 | Alexa Fluor 594 | Alexa Fluor 488 | Alexa Fluor 594 | Alexa Fluor 647 | ||
| 标准滤光片组 | FITC | Texas Red | FITC | Texas Red | Cy®5 | ||
| 激发/发射波长(nm) | 495/519 | 590/617 | 495/519 | 590/617 | 650/670 | ||
| 信噪比 | | | | | | ||
| 光稳定性 | | | | | | ||
| 多色标记 | 与抗体标记和常见细胞或组织染色方法兼容 | 可保留荧光蛋白的信号，适用于体内标记 | |||||
| 样品类型 | 针对培养细胞进行了优化 | 无洗涤方案；试剂可以直接加入培养基中 | |||||
| 规格 | 25个盖玻片/ 2个板 | 25个盖玻片/ 2个板 | 25个盖玻片/ 2个板 | 25个盖玻片/ 2个板 | 25个盖玻片/ 2个板 | ||
| 货号 | C10428 | C10429 | C10456 | C10457 | C10458 | ||
用于蛋白质稳态的 Click-iT HPG 试剂盒
Click-iT HPG Alexa Fluor 蛋白合成检测试剂盒提供了一种快速、灵敏、无毒的非放射性方法，采用荧光显微镜、高内涵成像或流式细胞仪检测新生蛋白合成。L-高炔丙基甘氨酸 (HPG，蛋氨酸的氨基酸类似物，含有炔基) 被添加到培养的细胞中，并在活性蛋白质合成过程中掺入蛋白质内。添加 Alexa Fluor 叠氮化物致使绿色荧光叠氮化物与炔基发生化学选择性连接或"点击"反应，从而通过成像分析检测修饰蛋白。
- 针对培养细胞进行了优化
- 蛋白质合成的定量测量
- 使用 Click-iT AHA 进行多重检测
Click-iT HPG Alexa Fluor 488 蛋白合成测定试剂盒可与 Click-iT AHA 和 Alexa Fluor 594 炔烃配合使用，用于新生蛋白合成差异的空间或时间测定。
图3.使用 Click-iT HPG 监测具有结构无关分子的蛋白合成的抑制。使用 Click-iT HPG Alexa Fluor 488 蛋白合成测定试剂盒，使用 2 种药物和 3 种不同细胞类型监测剂量依赖性下降。
以 Click-iT OPP 进行快速且灵敏的检测
Click-iT Plus OPP Alexa Fluor 蛋白合成检测试剂盒提供快速、灵敏和无放射性的方法，可用于使用荧光显微镜、高内涵成像或流式细胞分析进行蛋白质合成检测。在该测定中，O-炔丙基-嘌呤霉素 (OPP) 可在完全含蛋氨酸培养基中有效掺入新翻译的蛋白中并在快速、高特异性和温和点击反应中荧光标记明亮、光稳定的 Alexa Fluor 染料。
- 可在完全培养基中工作
- 保留荧光蛋白的信号
- 适用于体内标记
图4. 用于标记新生蛋白合成 (细胞核内显示为蓝色点状荧光)的 Click-iT Plus OPP Alexa Fluor 647 蛋白合成检测试剂盒。Talin-GFP 融合蛋白显示为绿色，F-肌动蛋白染色 显示为红色。
| 产品 | Click-iT AHA Alexa Fluor 488 蛋白合成检测试剂盒 |
|---|---|
| 靶标 | 新生蛋白合成 |
| 检测原理 | 蛋白在合成过程中被荧光标记物以"点击"化学反应原理标记 |
| 荧光染料 | Alexa Fluor 488 |
| 标准滤光片 | FITC |
| 激发/发射波长(nm) | 495/519 |
| 信噪比 | |
| 光稳定性 | |
| 多色标记 | 与抗体标记和常见细胞或组织染色方法兼容 |
| 样品类型 | 针对 HCS 测定进行了优化 |
| 规格 | 2 个板 |
| 货号 | C10289 |
用于蛋白质合成的 Click-iT AHA 试剂盒
Click-iT AHA Alexa Fluor 488 蛋白质合成 HCS 检测试剂盒为检测新生蛋白质合成提供了一种快速、灵敏、无毒，且无放射性的方法，可利用荧光显微镜和高通量成像进行检测。将 Click-iT AHA 添加至培养的细胞中，氨基酸在活性蛋白质合成过程中掺入蛋白质内。对掺入的氨基酸进行的检测利用了叠氮化物和炔烃之间的化学选择性连接或“click”反应，使用 Alexa Fluor 488 炔烃检测经过叠氮基修饰的蛋白质。
点击放大图片
图 5.剂量响应曲线。U-2 OS 细胞在无L-甲硫氨酸的培养基中处理，并用 50 μM Click-iT AHA 处理30分钟，同时加入茴香霉素（17 pM–1 μM）、环己酮（85 pM–5 μM）或普洛霉素（1.7 nM–100 μM）。清洗、固定、渗透后的细胞，与 Alexa 荧光剂 488 炔进行点击反应后，检测新生蛋白质的合成。使用 Thermo Fisher Scientific Cellomics ArrayScan VTI 平台进行成像和分析。
| 产品 | Click-iT 蛋白质富集试剂盒用于叠氮化物修饰蛋白质的点击化学捕获 |
|---|---|
| 靶标 | 新生蛋白合成 |
| 检测原理 | "点击"化学在合成过程中标记蛋白质以进行捕获 |
| 规格 | 离心柱 |
| 货号 | C10416 |
Click-iT 反应的缓冲液
Click-iT 反应缓冲液试剂盒针对采用叠氮化物或炔烃标记的生物分子标记的蛋白或细胞样品进行了优化。
| 产品 | 应用 |
|---|---|
| Click-iT 细胞反应缓冲液试剂盒 | 基于 0.5 mL 反应体积进行 50 次反应，用于后续流式细胞分析、荧光显微镜检查或高内涵 (HCS) 分析 |
| Click-iT 蛋白质反应缓冲液试剂盒 | 进行蛋白质的 click 反应，用于后续的标准蛋白质生化分析 (例如，蛋白质免疫印迹、质谱分析)。 |
细胞成像分析实验方案
多种实验方案可满足您的成像需求，涵盖从样品与试剂制备到染色、标记和数据分析方法。
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仅供科研使用，不可用于诊断目的。