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在这里您可以查找到有关Invitrogen Qubit 4荧光计和Qubit Flex荧光计最新的技术资源,包括大量应用和技术文档,如Qubit定量平台与Thermo Scientific Nanodrop分光光度计的比较,以及Qubit RNA检测试剂的偏差测试等,另外也包括了Qubit常见问题(FAQ)。
对于Qubit 1.0、Qubit 2.0及Qubit 3.0荧光定量仪的所有者,参见Qubit荧光定量仪旧有型号的相关资源
将Qubit 3.0或4荧光计连接到运行Windows操作系统的计算机上需要安装驱动程序。您可以从以下链接下载驱动和安装说明。
以下为Qubit荧光定量仪和Qubit荧光定量相关的常见问题和回答。
问:我已经有一台Nanodrop设备。为什么还要使用Qubit荧光定量仪?
答:Nanodrop设备使用UV吸光度进行检测,无法区分DNA、RNA、自由核苷酸,及其他污染物。Qubit检测试剂相比Nanodrop设备更加灵敏。Nanodrop分光光度计的全光谱吸收读数可以给出显示污染物存在的吸收峰。这对于污染物可能有害的下游应用来说可能是有用的信息。当配合使用时,Qubit荧光定量仪可以准确地检测样品的低浓度,Nanodrop分光光度计可以检测污染物。
问:为何我的UV吸光度读数要比Qubit荧光定量仪的读数更高?
答:UV吸光度读数会检测所有在260 nm处有吸收的物质,包括DNA、RNA、蛋白质、自由核苷酸和过量的盐。Qubit荧光定量则只会检测您感兴趣的目标分子,所以读数通常都要比A260读数要低。
问:Qubit荧光定量仪是否可以测量样品质量?
答:可以。您可以使用一种DNA定量试剂盒来检测DNA浓度,使用RNA试剂盒来检测RNA浓度,使用蛋白质试剂盒来检测蛋白质浓度。将您感兴趣的生物分子及担心的污染物对应的试剂盒结合使用。这些试剂盒可以一同给出您的样品中DNA、RNA及蛋白质含量的准确信息。
问:我已经有一台Qubit荧光定量仪,Qubit 4型荧光定量仪有什么不同之处?
答:Qubit 4型荧光定量仪拥有更大的颜色更鲜艳的触摸屏,可以实现无缝的工作流程设置,并且可以将数据导出至USB移动存储设备或通过USB数据线直接导出至您的电脑,从而实现更高效的数据管理。此外,这款设备支持个性化,可以只显示常用的检测项目,也可添加包括用户使用MyQubit检测设计工具创建的自定义检测项目,更可使用您选定的语言进行显示,包括英语、简体中文、法语、西班牙语、意大利语、德语及日语。
问:我是否可以在Qubit 4型荧光定量仪中使用过去的标记了“用于Qubit荧光定量仪”的Quant-iT试剂盒?
答:可以,这些试剂盒可以在所有型号Qubit荧光定量仪中工作。
问:Qubit荧光定量仪可以储存多少行数据?
答:Qubit 4型和3.0型荧光定量仪可以以.csv文件的方式保存多至1000例样品的数据。
Qubit 2.0型荧光定量仪可以以.csv文件的方式保存最多200行数据。
最初的Qubit荧光定量仪则可以以.csv文件的方式保存最多20行数据。
问:我是否每次都需要使用新的标准品?
答:不用。不过我们确实建议您每次配置新的工作溶液后使用新的标准品,这样标准品中所用的工作溶液就可与您样品中使用的保持一致。
问:稀释后的标准品可以保存和重复使用多长时间?如果过段时间后出现了蒸发情况呢(明显或不明显)?
答:稀释后的标准品可以使用3个小时,同时样品都需要使用相同的工作溶液。
问:Qubit荧光定量是否可以定量质粒?
答:可以。对于含大量DNA(超过50 ng/μL)的质粒小量制备样本可以使用Qubit DNA BR检测试剂。对于“plasmid rescue”或其他仅获得少量DNA的提取方法可以使用Qubit DNA HS检测试剂。
问:超螺旋状的DNA和松弛状的DNA之间是否存在信号差异?
答:存在。对于超螺旋DNA,我们推荐进行剪切以使DNA去超螺旋化,或者使用超螺旋DNA作为2号标准品。
问:Qubit蛋白质检测试剂在去污剂存在时是否可以正常工作?
答:该款试剂可以承受非常少量的去污剂。您可以查看Qubit蛋白质检测试剂盒产品手册第6页的表2“Qubit蛋白质检测试剂可承受的污染物”来获取具体数值。
评估用于二代测序 (NGS) 的DNA制备品质量
在投入精力和资源进行二代测序 (NGS) 之前,研究人员对DNA起始材料进行定量和质量评估是很重要的。在2013年的一篇文献中,Simbolo等人发表了一种可靠和高性价比的评估用于NGS的不同DNA制备品的质量的方法,也可用于从冷冻组织及FFPE样品中提取的DNA。在他们测试的设备中,数据显示使用Qubit荧光定量仪获取的DNA定量结果有着高度的可重复性,并与通过qPCR进行DNA定量的数据相一致——包括从FFPE样品提取的部分降解DNA。
仅供研究使用,不可应用于诊断程序。