F(ab) 和 F(ab')2 片段二抗是源自全长二抗的抗原结合片段，通常通过酶促切割。这些片段由于其片段大小较小和缺乏 Fc 区域，因此相对于完整 IgG 抗体具有几个优势。

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什么是 F(ab) 和 F(ab’)2 片段二抗？

F(ab) 片段抗体是通过木瓜蛋白酶切割完整 IgG 抗体获得的，这导致去除了 Fc 区域和铰链区。这使它们具有单价性质，并且大小约为完整 IgG 抗体的三分之一（约 50 kDa）。

另一方面，F(ab')2 片段抗体是通过胃蛋白酶切割完整 IgG 抗体获得的。它们缺乏 Fc 区域，但保留了铰链区，该区域通过二硫键将两个抗原结合位点连接在一起。这使得 F(ab')2 片段具有二价性质，并且大小约为完整 IgG 抗体的三分之二（约 100 kDa）。

F(ab) 和 F(ab')2 片段抗体均可与荧光基团或酶等多种标签偶联，用于免疫测定中的检测和可视化。这些片段在研究中得到广泛使用，以提高特异性和灵敏度，有助于获得准确可靠的实验结果。它们因具备的多功能性，使其成为了宝贵的研究工具。

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F(ab) 片段与完整 IgG 的比较的图示
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图 1.F(ab) 片段抗体的描述。该图展示了从全长抗体衍生出的 F(ab) 片段由单个 VH、CH、VL 和 CL 域组成，这些域共同形成一个单价的抗原结合片段。
F(ab’)2 片段与完整 IgG 的比较的图示
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图 2.F(ab’)2 片段抗体的描述。该图展示了从全长抗体衍生出的 F(ab')2 片段由两组 VH、CH、VL 和 CL 域组成，这些域通过铰链区延伸出的两个 CH 域之间的二硫键连接在一起。这些域共同构成了一个二价抗原结合片段。

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抗体片段的优点

F(ab) 抗体由于其片段大小较小和缺乏 Fc 区域，因此相对于完整 IgG 抗体具有几个优势。较小的尺寸使得 F(ab) 片段能够更好地渗透到组织切片中，并在免疫组织化学技术 (IHC) 等应用中改善染色效果。由于缺乏 Fc 区域，因此在对表达 Fc 受体的细胞和组织（如免疫细胞）进行染色时，非特异性背景信号减少，以及其他与 Fc 相互作用相关的干扰也减少。与完整 IgG 抗体相比，缺乏 Fc 区域还可以降低 F(ab) 和 F(ab')2 片段的免疫原性。Fc 特异性 F(ab) 片段还为免疫细胞化学技术、免疫组化、流式细胞分析和免疫印迹等应用提供了超出完整 IgG 抗体所能实现的更广泛的多重标记选项。例如，可以在同一个实验中使用针对兔 Fc 特异性的山羊抗兔 F(ab) 片段二抗和针对山羊 Fc 特异性的兔抗山羊 F(ab) 片段二抗。然而，如果使用全长的山羊抗兔二抗和全长的兔抗山羊二抗，则会导致染色效果不佳，因为这两种二抗倾向于彼此结合而不是结合靶标一抗。

虽然 F(ab) 片段是单价的且大小较小，在降低免疫原性和从同一宿主中连续标记多种一抗方面具有优势，但 F(ab')2 片段可提供更高的亲和力和改善靶标捕获能力。了解这些片段的特性和优势有助于更好地设计实验，从而实现更高的灵敏度和特异性。

抗体形式比较：

特性F(ab) 片段F（ab’）2 片段完整 IgG
基于 Fc-FcR 的非特异性相互作用-++++
组织渗透能力++++++
多重标记能力（使用 Fc 特异性二抗）+++++
连续标记来自同一物种/同种型的多种一抗+--
免疫原性++++++
价位单价二价二价
信号放大++++++

- 表示指定的属性不适用于该抗体形式
+ 表示抗体形式呈现指定的属性
++ 表示抗体形式能在更大的程度上呈现指定的属性
+++ 表示抗体形式能在最大程度上呈现指定的属性

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图 3.免疫荧光分析比较 Fc 特异性 F(ab) 片段二抗与完整 IgG 二抗的多重标记能力。在室温下用 2% BSA 封闭 MCF7 细胞，经过固定和透化，并经过 H3K4me3 重组兔单克隆抗体 (14H24L5)（货号 703849；稀释比为 1:100），β 微管蛋白单克隆抗体 (2 28 33) （货号 32-2600；稀释比为 1:500）和 TROP2 多克隆抗体（货号 PA5-47030；稀释比为 1:100）抗体混合物在 4°C 下在 0.1% BSA 中孵育过夜进行染色，进行免疫荧光分析。通过与以下混合物孵育来检测信号：F(ab)-山羊抗兔 IgG Fc 二抗，Alexa Fluor 488（货号 A66785；使用浓度为 1 µg/mL）、F(ab)-山羊抗鼠 IgG1 Fc 二抗，Alexa Fluor 555（货号 A66782；使用浓度为 1 µg/mL）、F(ab)-兔抗山羊 IgG Fc 二抗，Alexa Fluor 647（货号 A66784；使用浓度为1 µg/mL），或者与以下混合物孵育：山羊抗兔 IgG (H+L) 交叉吸附二抗，Alexa Fluor 488（货号 A11008；使用浓度为 4 µg/mL）、山羊抗鼠 IgG (H+L) 交叉吸附二抗，Alexa Fluor 555（货号 A21422；使用浓度为2 µg/mL）、兔抗山羊 IgG H&L，Alexa Fluor 647，在室温下孵育 1 小时。图板 a-e 显示的是用 Fc 特异性 F(ab) 片段二抗染色的样品图像。图板 a) 显示的是用核染料 Hoechst 33342（货号 H1399；稀释比为 1:500）染色的细胞。图板 b) 显示的是 H3K4me3 的核表达。图板 c) 显示的是 β-微管蛋白的胞质表达。图板 d) 显示的是 TROP2 蛋白的细胞膜表达。图板e) 显示的是用 Alexa Fluor Plus 750 鬼笔环肽（货号 A30105；稀释比为 1:400）染色的细胞。图板 f-j 显示的是用全长 IgG 二抗染色的样品图像。图板 f) 显示的是用核染料 Hoechst 33342（货号 H1399；稀释比为 1:500）染色的细胞。图板 g) 显示的是 H3K4me3 在细胞核中的表达缺失。图板 h) 显示的是 β-微管蛋白的胞质表达。图板 i) 显示的是 TROP2 蛋白在细胞膜上的表达缺失。图板 j) 显示的是用 Alexa Fluor Plus 750 鬼笔环肽（货号 A30105；稀释比为 1:400）染色的细胞。H3K4me3 和 TROP2 信号缺失是由于在同一实验中使用山羊抗兔和兔抗山羊全长 IgG 二抗的不相容性所致。这些图像是在 CellInsight CX7 LZR 高内涵筛选 (HCS) 平台上（货号 CX7A1110LZR）以 40 倍放大率拍摄的。

图 4.经染色的 HeLa 细胞。在室温下用 2% BSA 封闭 HeLa 细胞，经过固定和透化，并与 β-微管蛋白单克隆抗体（1 µg/mL；货号 32-2600）在 4°C 下在 0.1% BSA 中孵育过夜进行染色，然后用 F(ab)-山羊抗鼠 IgG1 Fc 二抗，Alexa Fluor 568（1 µg/mL；货号 A66783）进行免疫荧光分析。通过与 F(ab)-山羊抗鼠 IgG1 Fc 二抗，Alexa Fluor 568（1 µg/mL；货号 A66783）在室温下孵育 1 小时来进行检测。图中显示的是用 Hoechst 33342 染色的细胞核和用抗体检测的 β-微管蛋白的复合图像（1:500；货号 H1399）。这些图像是在 CellInsight CX7 LZR 高内涵筛选 (HCS) 平台上（货号 CX7A1110LZR）以 20 倍放大率拍摄的。

图5.经染色的小鼠结肠细胞。使用 F(ab)-山羊抗鼠 IgG1 Fc 二抗，Alexa Fluor 488（货号 A66781）对小鼠结肠 FFPE（福尔马林固定石蜡包埋）切片进行了免疫组化分析。脱蜡后的切片使用 eBioscience IHC 抗原修复液 - 高 pH (10X)（货号 00-4956-58）进行热诱导抗原修复，并在室温下用 2% 正常山羊血清封闭 1 小时。切片随后用 Desmin 单克隆抗体 (DE-U-10)，eBioscience（5 µg/mL；货号 14-9747-82）在 4°C 条件下孵育过夜。通过与 F(ab)-山羊抗鼠 IgG1 Fc 二抗，Alexa Fluor 488（1 µg/mL；货号 A66781）在 0.1% 正常山羊血清中室温孵育 45 分钟进行检测。自发荧光使用 ReadyProbes Tissue Autofluorescence Quenching 试剂盒（货号 R37630）进行淬灭，细胞核用 DAPI（货号 D1306）进行染色。切片使用 ProLong Glass Antifade Mountant（货号 P36984）进行封片。图像是在 EVOS M7000 成像系统（货号 AMF7000）上以 20 倍放大率拍摄的。图中显示的是用 Desmin 蛋白抗体染色的小鼠结肠切片和用 DAPI 染色的细胞核的复合图像。

图 6.经染色的 769P 细胞。769P 细胞用 1 µg/mL 的兔 IgG 同型对照抗体 (RbNP15)，eBioscience（货号 14-4616-82）（蓝色直方图）或 CD365 (Tim-1) 重组兔单克隆抗体 (P365D)，eBioscience（货号 14-3658-82）（粉红色直方图）进行染色，然后用 F(ab)-山羊抗兔 IgG Fc 二抗，Alexa Fluor 647（货号 A66788）浓度为 1 µg/mL，进行检测。活细胞用于流式细胞分析，通过 LIVE/DEAD Fixable Green Dead Cell Stain 试剂盒（货号：L23101）（适用于 488 nm 激发）确定细胞活力。

图 7.F(ab) 片段的免疫印迹分析。使用 F(ab)-山羊抗鼠 IgG1 Fc 二抗，Alexa Fluor 647（货号 A66784）进行免疫印迹分析，其中加载了不同量的 HeLa 全细胞提取物：64 µg（泳道 1），32 µg（泳道 2），16 µg（泳道 3），8 µg（泳道 4），并使用 Novex NuPAGE 4-12% Bis-Tris 凝胶（货号 NP0321BOX）进行电泳。将分离的蛋白质随后使用 iBlot 2 干式转印系统（货号 IB21001）转移到硝酸纤维素膜（货号 IB23001）上。免疫印迹分析使用 β-微管蛋白单克隆抗体 (2 28 33)（货号 32-2600）稀释比为 1:5,000，进行探针孵育，并使用 F(ab)-山羊抗鼠 IgG1 Fc 二抗，Alexa Fluor 647（货号 A66784）稀释比为 1:500，进行荧光成像检测，成像系统采用 iBright FL 1500（货号 A44115）。该抗体可以在多重荧光免疫印迹分析实验中使用，如图所示，使用 HSP90 α 多克隆抗体（货号 PA3-013）稀释比为 1:5,000，进行探针孵育，并使用其相应的偶联二抗 F(ab)-山羊抗兔 IgG Fc 二抗，Alexa Fluor 488（货号 A66785）稀释比为 1:500，进行检测。

图 8.经 Alexa Fluor Plus 488 染料染色的人结肠细胞。人结肠 FFPE 组织切片通过一系列二甲苯和梯度乙醇洗涤，并最终用去离子水 (ddH2O) 洗涤进行脱蜡。通过在 IHC 抗原修复液 - 低 pH（货号 00-4955-58）中压力煮沸组织 10 分钟，然后缓慢冷却 20 分钟,完成抗原修复。切片干燥后，用 PAP 免疫组化笔标记屏障。组织用 0.5% Triton X-100 在 PBS 中透化 15 分钟，然后去除。用 3% BSA/5% 正常山羊血清/PBS 封闭组织。在去除封闭液后，组织用 300 µL 鼠抗 Cadherin-17 单克隆抗体（货号 MA5-29135）稀释比例为 1:250，在封闭液中，在 4°C 下于湿度箱中过夜孵育。用 225 mL PBS 中洗涤组织 3 x 5 分钟。将 300 µL 的 F(ab')2 山羊抗鼠 IgG Alexa Fluor Plus 488（绿色，货号 A48286）稀释比例为 1:500，加入到组织中，在封闭液中于室温下孵育 1 小时，然后用 PBS 洗涤 3 次，每次 5 分钟。洗涤后，将 Hoechst 33342（蓝色，货号 H1399）稀释比例为 1:4,000，和 Tomato Lectin DyLight 649（红色，货号 L32472）稀释比例为 1:100，加入到组织中，在封闭缓冲液中孵育 30 分钟，然后用 PBS 快速洗涤两次，最后用 ddH2O 冲洗一次。组织用 ProLong Glass 封片剂（货号 P36982）封片，并在 EVOS M7000 成像系统（货号 AMF7000）上进行成像。

图 9.经 Alexa Fluor Plus 555 染料染色的人结肠细胞。人结肠 FFPE 组织切片通过一系列二甲苯和梯度乙醇洗涤，并最终用去离子水 (ddH2O) 洗涤进行脱蜡。通过在 IHC 抗原修复液 - 低 pH（货号 00-4955-58）中压力煮沸组织 10 分钟，然后缓慢冷却 20 分钟,完成抗原修复。切片干燥后，用 PAP 免疫组化笔标记屏障。组织用 0.5% Triton X-100 在 PBS 中透化 15 分钟，然后去除。用 3% BSA/5% 正常山羊血清/PBS 封闭组织。在去除封闭液后，组织用 300 µL 鼠抗 Cadherin-17 单克隆抗体（货号 MA5-29135）稀释比例为 1:250，在封闭液中，在 4°C 下于湿度箱中过夜孵育。用 225 mL PBS 中洗涤组织 3 x 5 分钟。将 300 µL 的 F(ab')2 山羊抗鼠 IgG Alexa Fluor Plus 555（橙色，货号 A48287）稀释比例为 1:500，加入到组织中，在封闭液中于室温下孵育 1 小时，然后用 PBS 洗涤 3 次，每次 5 分钟。洗涤后，将 Hoechst 33342（蓝色，货号 H1399）稀释比例为 1:4,000，和 Tomato Lectin DyLight 488（绿色，货号 L32470）稀释比例为 1:100，加入到组织中，在封闭缓冲液中孵育 30 分钟，然后用 PBS 快速洗涤两次，最后用 ddH2O 冲洗一次。组织用 ProLong Glass 封片剂（货号 P36982）封片，并在 EVOS M7000 成像系统（货号 AMF7000）上进行成像。

    

仅供科研使用，不可用于诊断目的。

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