Anti-Mouse Secondary Antibodies

Invitrogen 抗小鼠二抗是亲和纯化的多克隆抗体,对小鼠免疫球蛋白类别、亚类和片段具有充分表征的特异性。它们在检测、分选或纯化指定靶标(一抗)时很有用。我们提供在山羊、驴、家兔、鸡、大鼠、牛、绵羊、羊驼、马和小鼠等各种宿主物种中产生的抗小鼠二抗。

  • 荧光偶联物(Alexa Fluor Plus、荧光素 (FITC) 和其他经典荧光偶联物
  • 未标记,未偶联
  • 酶偶联物(碱性磷酸酶 (AP) 或辣根过氧化物酶 (HRP))
  • 经生物素酰化处理(生物素偶联物)

生产抗小鼠二抗

通过对来自靶物种(即小鼠)的免疫球蛋白 (Ig) 混合细胞群的宿主动物(例如山羊)进行免疫化处理,由此产生抗小鼠二抗。宿主动物免疫系统对产生抗小鼠 Ig 抗体进行应答后,我们将收集血清并纯化靶抗体。通过使用不同的生产和纯化方法,我们能够生产并提供多种不同种类的抗小鼠二抗,帮助研究人员优化其检测方案。例如,由于小鼠会产生多种类别和亚类(例如:IgG1、IgG2 和 IgM) 的免疫球蛋白 (Ig) [1],因此在特定实验中使用多种小鼠单克隆一抗可能会具有不同的亚类特性;通过使用亚类特异性二抗,可以在多通路检测中同时检测不同的一抗,尽管一抗来自相同的宿主物种(小鼠)。

纯化抗小鼠二抗以防止发生交叉反应

二抗通常使用偶联至琼脂糖基质的靶性抗原(一抗类别、亚类和片段)来进行亲和纯化。这种亲和纯化(阳性筛选)可以消除血清源中的非特异性抗体和其他蛋白,从而制备针对可许多应用提供高特异性和低背景信号的靶标特异性多克隆抗体。在标记前,先对偶联物抗体进行亲和纯化。

通过将抗体转移至含有固定血清蛋白或选定物种 IgG 的亲和柱上,进一步纯化所选二抗。因此,可以去除与这些固定血清蛋白相结合(吸附)的多克隆制备物中的任何抗体(阴性筛选)。该抗体根据其发生的处理量,被指定为交叉吸附或高度交叉吸附。附加处理可提高抗体的特异性,并有助于消除其他非靶抗体和蛋白质的交叉反应。

抗小鼠 IgG 抗体还可以与其他非靶标物种的蛋白发生交叉反应。这包括与其他 IgG 分子发生可能的交叉反应。交叉反应会导致二抗的非特定结合,导致灵敏度降低和背景升高。

小鼠蛋白质组与多种哺乳动物物种的蛋白质组同源(参见表格)。由于蛋白质组之间存在相似性,因此纯化过程非常重要。在具有相似 IgG 类别(或其他蛋白质)的物种之间可能发生交叉反应,从而导致特异性结果更低和背景更高。采取纯化二抗的额外步骤,消除交叉反应,获得更好的实验结果。

各物种与小鼠之间的总蛋白质组同源性百分比 [2]

物种同源性百分比
大鼠81%
74%
72%
71%
<53%
精選的产品数据
颗粒神经元和神经胶质细胞混合细胞群细胞骨架的共聚焦显微图。
颗粒神经元和神经胶质细胞混合细胞群细胞骨架的共聚焦显微图。F-肌动蛋白用红色荧光的 Texas Red-X 鬼笔环肽(货号:T7471)进行染色。使用小鼠单克隆抗-ß-微管蛋白一抗检测微管,随后通过绿色荧光 Alexa Fluor 488 山羊抗小鼠 IgG 抗体(货号:A-11001)显色。该图片由 Jonathan Zmuda (Immunomatrix, Inc.) 提供
使用 Alexa Fluor 488 抗小鼠二抗检测 BPAE 细胞中的 β 微管蛋白。
使用 Alexa Fluor 488 抗小鼠二抗检测 BPAE 细胞中的 β 微管蛋白。使用 Image-iT 固定/透化试剂盒 (R37602) 固定和透化细胞,使用抗 β 微管蛋白抗体标记,然后使用 Alexa Fluor 488 山羊抗小鼠二抗(货号:A-11029)和 Click-iT EdU Alexa Fluor 647 (C10340) 进行染色。图像使用 Nikon 立式显微镜 (60x) 采集。
使用 Alexa Fluor 594 抗小鼠二抗检测 α 微管蛋白。

使用 Alexa Fluor 594 抗小鼠二抗检测 α 微管蛋白。牛肺动脉内皮细胞使用 Alexa Fluor 488 鬼笔环肽(货号:A12379)对 F-肌动蛋白进行标记,以及使用我们的小鼠单克隆抗 α 微管蛋白抗体(货号:A11126)以及与山羊抗小鼠 IgG 抗体的 Alexa Fluor 594 染料偶联的 F (AB′) 2 片段(货号:A-11020)用于微管染色。多曝光图像使用适用于 Texas Red 染料和荧光素的带通滤光片组采集。

特色带注释产品的参考文献
  • A-11001 was used in immunohistochemistry to study the role of autophagy in normothermic and hypothermic spinal cord ischemia.Fujita S, Sakurai M, Baba H et al.(2015) Autophagy-mediated stress response in motor neurons after hypothermic spinal cord ischemia in rabbits.J Vasc Surg 65(5):1312–1319.
  • A-11029 was used in immunocytochemistry to assess the effects of fucoidan on diabetic nephropathy related to spontaneous diabetes.Wang Y, Nie M, Lu Y et al.(2015) Fucoidan exerts protective effects against diabetic nephropathy related to spontaneous diabetes through the NF-κB signaling pathway in vivo and in vitro.Int J Mol Med 35(4):1067–1073.
  • A-21202 was used in immunohistochemistry–frozen sections to study the Pavlovian-instrumental transfer effect of the rostral medial ventral pallidum region innervated by the nucleus accumbens shell.Leung BK and Balleine BW (2015) Ventral pallidal projections to mediodorsal thalamus and ventral tegmental area play distinct roles in outcome-specific Pavlovian-instrumental transfer.J Neurosci 35(12):4953–4964.
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Superclonal 二抗

Thermo Scientific Superclonal 二抗是一种重组抗体技术,可在一系列应用中精确且准确地检测小鼠、家兔和山羊一抗。每一份 Superclonal 二抗均经过专门配制和优化,可助您实现出色的 ELISA、免疫印迹、细胞成像和免疫细胞化学技术/免疫组织化学技术。

参考文献
  1. Manning, C. F., Bundros, A. M., & Trimmer, J. S. (2012) Benefits and Pitfalls of Secondary Antibodies: Why Choosing the Right Secondary Is of Primary Importance.PLoS ONE,7(6). doi:10.1371/journal.pone.0038313
  2. MGI – Mouse Vertebrate Homology.(2016) 于 2016 年 6 月 30 日通过 http://www.informatics.jax.org/homology.shtml 进行检索。