细胞因子中的肿瘤坏死因子（TNF）超家族是一类多功能促炎细胞因子，可激活与细胞存活、凋亡、炎症反应和细胞分化相关的信号通路。通过两种受体 TNFR1（TNF 受体-1 或 CD120a）和 TNFR2（TNF 受体-2 或 CD120b）诱导对肿瘤坏死因子的细胞应答。TNFR1 在大多数人体组织中通过与 TNF α 结合而被激活。TNFR2 在免疫细胞中表达，并可被 TNFα 和 TNFβ 激活 [1]。Thermo Scientific™ 具有多种产品可帮助进行 TNF 研究。

关键 TNF 通路靶点

TNF 与许多信号通路靶标相互作用，包括：

AP-1Caspase 9NFκB
APAF1CIAPNIK
ATF细胞色素 Cp38
BIDELK1RAIDD
tBIDERKRIP
c-FOSFADDSODD
c-JunIκBTAK1
Caspase 1IKKTRADD
Caspase 2ITRAFTRAF2
Caspase 3JNK1TRAF3
Caspase 6MADDXIAP
Caspase 7MAPK 
Caspase 8MEKK 

作为对炎症和感染的应答，促炎细胞因子 TNFα 由巨噬细胞、淋巴细胞、成纤维细胞和角质形成细胞产生。TNFα 最初通过与细胞表面受体 TNFR1（p55）和 TNFR2（p75）结合而引发促炎信号。TNFR1 和 TNFR2 通过三种不同信号通路引发细胞对 TNFα的应答，导致 caspases 激活以及 AP-1 和 NFκB 转录因子的激活 [2]。激活 TNFα 导致 TNFR1 受体发生三聚化以及位于 TNFR1 蛋白胞质区的死亡结构域的结合。

死亡结构域的聚集引起 TRADD（TNFR 相关死亡结构域）衔接蛋白的募集。其他 TRADD 介导的 FADD（Fas 相关死亡结构域）、RAIDD（具有死亡结构域的 RIP 相关 ICH-1/CED-3 同源蛋白）、MADD（MAPK 激活死亡结构域）和 RIP（受体相互作用蛋白）的募集诱发激活 caspase 8。Caspase 8 介导一系列受调节的蛋白切割事件，最终导致细胞凋亡。

caspase 8 对 BID（BH3 相互作用死亡结构域）切割产生 tBID（截短型 BID），导致线粒体膜破坏和细胞色素 C（CytoC）的释放。CytoC 与 APAF1（凋亡蛋白酶激活因子-1）结合使得 caspase 9 被募集，caspase 9 切割 caspase 3 产生其活性形式。XIAP（X-linked inhibitor of apoptosis，X 连锁凋亡抑制蛋白）可抑制该信号通路中此阶段 caspase 的激活。

TRAF2（TNF 受体相关因子-2）与 TRADD 的结合介导转录因子 AP-1 和 NFκB 通过 TNF 信号转导的激活，从而与 MADD 和 RIP 形成完全激活的复合物。该复合物与 NIK（NF-κB-诱导激酶）结合后可磷酸化 IκK，此时，NFκB 易位至细胞核，引发 IκB 降解 [3]。TNFR1、TRADD、TRAF2、MADD、RIP 复合物（Jun NH2-末端激酶）可激活 MAPK，由此可激活 AP-1 转录复合物。AP-1 是许多应激和生长相关基因转录激活所必需 [4]。

数据

Thermo Scientific™ 为 TNF 信号通路中的关键靶点提供抗体、ELISA、Luminex 多重检测和生长因子。

以下是使用 Thermo Scientific™ 产品的 ELISA 和流式细胞分析数据。

TNF-alpha_Antibody_PBOTNFAI_ELISA_1_20141103090101
用浓度为10 μg/mL 的抗牛 TNF-α 多克隆抗体（产品编号 PBOTNFAI）以100 µL/孔进行包被，并在 4℃ 下孵育过夜，进行 TNF-α 的 ELISA 分析。使用在 PBST 中稀释的3%牛血清白蛋白（BSA）封闭孔板1小时。用200 µL/孔 PBST 洗涤孔板6次，然后在室温下以100 µL/孔重组牛 TNF-α 蛋白标准品和组织培养上清液中的重组绵羊 TNF-α（均以未知浓度开始的按照 Log2 稀释的稀释液）孵育1小时。用洗涤缓冲液将孔板洗涤6次，并在室温下用浓度为1 µg/mL 的抗牛 TNF-α 生物素偶联多克隆抗体（产品编号 PBOTNFABI）以100 µL/孔孵育1小时。用洗涤缓冲液将孔板洗涤6次，然后使用2 µg/mL 的 HRP-偶联链霉素亲和素在室温下扩增信号1小时。以100 µL/孔使用3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB）检测10分钟。用 0.2M 硫酸终止反应。在分光光度计上于450 nm 处读取吸光度（光密度 [OD] 值）。
MCD0401-FIX-Perm
C57BL/6 脾细胞未进行刺激，或者在存在布雷非德菌素 A 的情况下，使用佛波醇肉豆蔻酸酯（PMA）和离子霉素对 C57BL/6 脾细胞刺激5小时。然后用抗小鼠 CD4 FITC（产品编号 MCD0401）对细胞进行表面染色，随后使用 FIX & PERM 细胞透化试剂盒（产品编号 GAS003 或 GAS004）进行固定和透化，并用抗小鼠干扰素 γ（IFN-γ）PE-Cy7 偶联物（产品编号 A18713）和抗小鼠肿瘤坏死因子（TNF-α）PPacific Blue™ 偶联物（产品编号 RM90128）进行细胞内染色。使用 Attune 声波聚焦流式细胞仪（蓝色/紫色）采集样品，采用488 nm 激发和530/30 nm 带通发射滤光片检测 FITC，采用640 nm 长通滤光片检测 PE-Cy7 偶联物。使用405 nm 激发和450/40 nm 带通发射滤光片检测 Pacific Blue™ 荧光。图 A：在存在布雷非德菌素 A 的情况下，未进行刺激（左图）或用 PMA 和离子霉素刺激（右图）的总小鼠脾细胞的 IFN-γ 和 TNF-α 共染色。图 B：用上述条件刺激后 CD4 T 细胞表达 TNF-α（左图）和 IFN-γ（右图）。

参考文献

  1. Kawasaki H. et al.(2002) Identification of genes that function in the TNFα-mediated apoptotic pathway using randomized hybrid ribozyme libraries.Nat Biotechnol 20: 376-80.
  2. Kagoya, Y. et al.(2014) Positive feedback between NF-κB and TNF-α promotes leukemia-initiating cell capacity.J Clin Invest 124(2): 528-542.
  3. Baud V. et al.(2001) Signal transduction by tumor necrosis factor and its relatives.Trends Cell Biol 11: 372-7.
  4. Kai-Li He. et al.(2002) A20 Inhibits Tumor necrosis factor (TNF) α-Induced apoptosis by disrupting recruitment of TRADD and RIP to the TNF receptor 1 complex in jurkat T cells.Mol Cell Biol 22: 6034-6045.

产品名称货号
c-Myc 抗体132500
细胞色素 C 抗体456100
Caspase 3 抗体PA516335
RIPK1 抗体
PA520811
c-Fos 抗体
PA1830
TAK1/MAP3K7 抗体
PA517507
BID [p15] 抗体
44433G
XIAP 抗体PA529253
MEKK1/MAP3K1 抗体PA515085
p38 抗体PA527831
ELK1 抗体
458700
Caspase 1 抗体
PA529342
Caspase 8 抗体
PA137242
TRAF2 抗体
PA529238
TRAF3 抗体
PA141107
cIAP 抗体
PA520066
FADD 抗体
PA517808
TRADD 抗体
PA521595
Apaf1 抗体PA519893