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TrypLE 酶
Gibco TrypLE 温和细胞解离试剂
TrypLE 酶是血清添加和不含血清条件的理想选择，是无动物源性胰蛋白酶样酶的答案。这种酶表现出与胰蛋白酶相似的 pH 值活性谱，在精氨酸和赖氨酸处裂解。由于 TrypLE 酶的无动物来源，消除了潜在致病污染物的危害；并经过受控的发酵过程，TrypLE 酶可以在任何规模下供应。
TrypLE 酶可以无缝地适应您的工作流程。TrypLE 酶可以在现有方案中替代胰蛋白酶，这种酶在室温下稳定，对细胞非常温和。因爲 TrypLE 酶非常温和，不需要抑制剂。而是仅通过稀释来灭活。此外，TrypLE 酶具有与猪胰蛋白酶相似的解离动力学，以及类似的细胞再接种、增殖动力学和长期维持。
TrypLE 产品提供更环保、更经济的细胞解离。有关更多信息，请参阅我们的 TrypLE 酶资源
为您的细胞培养选择正确的 TrypLE 酶
| TrypLE Express | TrypLE Select | |
|---|---|---|
| 特点 | 更温和、更稳定、成本可比性 | 更温和、更稳定、不含动物和人成分 |
| 酚红 | 可选择含或不含酚红 | 无酚红 |
| 应用实例 | 通用 | 生物生产/工业应用 |
| 来源 | 真菌 （无动物来源） | 真菌 （无动物来源） |
| 生产标准 | cGMP 生产 | cGMP，在专用的无动物源性机器上生产 |
| 贮存温度 | 室温 | 室温 |
| 细胞活力更高 | ✓ | ✓ |
| 灭活方法 | 稀释抑制 | 稀释抑制 |
TrypLE Express 试剂
使用相同的重组真菌胰蛋白酶样蛋白酶，TrypLE Express 试剂的生产价格与标准胰蛋白酶相当。与 TrypLE Select 配方不同，TrypLE Express 试剂提供含和不含酚红形式。
有关释放时间、稳定性统计和纯度和电接种效率的数据，请参阅下文 TrypLE Express 性能数据。
TrypLE Express 性能数据
TrypLE Express 试剂在保留细胞表面表位表达方面优于胰蛋白酶
图1.TrypLE Express 试剂保留细胞表面表位表达。用0.05%胰蛋白酶 （A） 或 TrypLE Express 试剂 （B） 处理 Jurkat 细胞长达20分钟。然后通过流式细胞术用 APC 偶联的抗 CD2 单克隆抗体测量细胞表面 CD2 水平。如图所示，用0.05%胰蛋白酶处理的细胞显示出 CD2 水平明显随时间降低，用 TrypLE Express 试剂处理的细胞无出现可测量的 CD2 损失。
流式细胞分析：小鼠 CNS 组织的细胞解离
图2.使用 TrypLE 试剂的细胞活力优于 Accutase 试剂。
解离时间：10分钟；活力（%） +/- SEM。改编自 Panchision DM 等人Stem Cells, 25:1560 (2007). doi:10.1634/stemcells.2006-0260的数据。
图3.CD24 表位被 TrypLE 保留，而使用木瓜蛋白酶则 CD24 表位完全丧失。改编自 Panchision DM 等人Stem Cells, 25:1560 (2007). doi:10.1634/stemcells.2006-0260的数据。
使用 TrypLE 酶时工作流程方面的获益
TrypLE 酶简化了您的工作流程。例如，用动物胰蛋白酶或 TrypLE 表达处理并用 OptiPro SFM 再接种的细胞在解离后未清洗。此外，没有使用蛋白酶抑制剂。24 小时后，记录形态变化。如下图所示，TrypLE 酶处理的细胞保留其结构，而胰蛋白酶细胞经历进一步的细胞降解。
动物胰蛋白酶
TrypLE Express
图4.在没有蛋白酶抑制剂的情况下，TrypLE 酶处理的细胞在解离后未清洗时保留其结构。 TrypLE 酶处理的细胞在这些条件下保持其形态，但胰蛋白酶处理的细胞经历了进一步的降解。
TrypLE Express 试剂在保留细胞表面表位表达方面优于胰蛋白酶
图1.TrypLE Express 试剂保留细胞表面表位表达。用0.05%胰蛋白酶 （A） 或 TrypLE Express 试剂 （B） 处理 Jurkat 细胞长达20分钟。然后通过流式细胞术用 APC 偶联的抗 CD2 单克隆抗体测量细胞表面 CD2 水平。如图所示，用0.05%胰蛋白酶处理的细胞显示出 CD2 水平明显随时间降低，用 TrypLE Express 试剂处理的细胞无出现可测量的 CD2 损失。
流式细胞分析：小鼠 CNS 组织的细胞解离
图2.使用 TrypLE 试剂的细胞活力优于 Accutase 试剂。
解离时间：10分钟；活力（%） +/- SEM。改编自 Panchision DM 等人Stem Cells, 25:1560 (2007). doi:10.1634/stemcells.2006-0260的数据。
图3.CD24 表位被 TrypLE 保留，而使用木瓜蛋白酶则 CD24 表位完全丧失。改编自 Panchision DM 等人Stem Cells, 25:1560 (2007). doi:10.1634/stemcells.2006-0260的数据。
使用 TrypLE 酶时工作流程方面的获益
TrypLE 酶简化了您的工作流程。例如，用动物胰蛋白酶或 TrypLE 表达处理并用 OptiPro SFM 再接种的细胞在解离后未清洗。此外，没有使用蛋白酶抑制剂。24 小时后，记录形态变化。如下图所示，TrypLE 酶处理的细胞保留其结构，而胰蛋白酶细胞经历进一步的细胞降解。
动物胰蛋白酶
TrypLE Express
图4.在没有蛋白酶抑制剂的情况下，TrypLE 酶处理的细胞在解离后未清洗时保留其结构。 TrypLE 酶处理的细胞在这些条件下保持其形态，但胰蛋白酶处理的细胞经历了进一步的降解。
TrypLE Select 试剂
TrypLE Select 酶在专用的无动物源性机器上生产，专为生物生产行业设计。Select 酶有两种浓度，1倍和10倍，不含酚红。使用10倍全强度可以迅速温和地分离强贴壁细胞。
有关释放时间、稳定性统计和纯度与电接种效率的数据，请参阅下文 TrypLE Select 数据。
TrypLE Select 性能数据
细胞释放时间
以下细胞系用1倍或10倍浓度的 TrypLE Select 酶处理。观察并记录它们的平均细胞释放时间和平均活力。
| （1x） | （10x） | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| 强度 | 细胞系 | 培养基 | 平均细胞 释放时间 | 平均值 活力 | 平均细胞 释放时间 | 平均值 活力 |
| 贴壁 | 293F | DMEM + 5% FBS | 2分钟 | 97% | ||
| VERO | VP-SFM | 5 分钟 | 100% | |||
| VERO | EMEM + 5% FBS | 8 分钟 | 100% | |||
| VERO | OptiPRO SFM | 7 分钟 | 98% | |||
| CHO-K1 | CHO III A | 7 分钟 | 95% | |||
| 强贴壁 | PK-15 | EMEM + 10% FBS | 27 分钟 | 98% | 11.7±2.0分钟 | 99.4%±0.3% |
| PK-15 | Gibco OptiPRO SFM | 11 分钟 | 99% | |||
| MDCK | OptiPRO SFM | 28 分钟 | 98% | 15.3±0.8 分钟 | 98.7%±0.5% | |
| MDCK | DMEM + 5% FBS | 15 分钟 | 100% | 8.0±1.3 分钟 | 98.8%±0.5% | |
| A549 | DMEM + 10% FBS | 9 分钟 | 98% | 5.2±0.3 分钟 | 99.1%±0.5% | |
| MSC | DMEM + 10% MSC FBS | 7.8±1.2 分钟 | 98.7%±1.3% | |||
| MSC | Gibco StemPro MSC SFM | 8.7±1.5 分钟 | 97.5%±0.1% | |||
稳定性统计
在不同温度下，与粗猪胰蛋白酶或纯化猪胰蛋白酶相比，TrypLE Select 酶表现出优越的稳定性。即使在37℃下工作8周后，TrypLE Select 酶仍保持50%的活性，而仅两天后，纯化的猪胰蛋白酶活性迅速下降。
图5.TrypLE Select 酶稳定性。在不同的储存温度下，与粗猪胰蛋白酶或纯化猪胰蛋白酶相比，TrypLE Select 酶表现出优越的稳定性。即使在37℃下工作8周后，仍保留50%的酶活性。所有样品均避光储存。
图6.纯化猪胰蛋白酶稳定性。在37℃下储存的纯化猪胰蛋白酶样品中的酶活性迅速下降。
接种效率
用 TrypLE Select 酶以每孔100–200个细胞分离的细胞与用猪胰蛋白酶处理的细胞相比，具有更高的接种效率。
图7.TrypLE Select 酶可提高接种效率。用 TrypLE Select 酶分离的细胞与用猪胰蛋白酶分离的细胞相比，表现出更高的接种效率。
细胞释放时间
以下细胞系用1倍或10倍浓度的 TrypLE Select 酶处理。观察并记录它们的平均细胞释放时间和平均活力。
| （1x） | （10x） | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| 强度 | 细胞系 | 培养基 | 平均细胞 释放时间 | 平均值 活力 | 平均细胞 释放时间 | 平均值 活力 |
| 贴壁 | 293F | DMEM + 5% FBS | 2分钟 | 97% | ||
| VERO | VP-SFM | 5 分钟 | 100% | |||
| VERO | EMEM + 5% FBS | 8 分钟 | 100% | |||
| VERO | OptiPRO SFM | 7 分钟 | 98% | |||
| CHO-K1 | CHO III A | 7 分钟 | 95% | |||
| 强贴壁 | PK-15 | EMEM + 10% FBS | 27 分钟 | 98% | 11.7±2.0分钟 | 99.4%±0.3% |
| PK-15 | Gibco OptiPRO SFM | 11 分钟 | 99% | |||
| MDCK | OptiPRO SFM | 28 分钟 | 98% | 15.3±0.8 分钟 | 98.7%±0.5% | |
| MDCK | DMEM + 5% FBS | 15 分钟 | 100% | 8.0±1.3 分钟 | 98.8%±0.5% | |
| A549 | DMEM + 10% FBS | 9 分钟 | 98% | 5.2±0.3 分钟 | 99.1%±0.5% | |
| MSC | DMEM + 10% MSC FBS | 7.8±1.2 分钟 | 98.7%±1.3% | |||
| MSC | Gibco StemPro MSC SFM | 8.7±1.5 分钟 | 97.5%±0.1% | |||
稳定性统计
在不同温度下，与粗猪胰蛋白酶或纯化猪胰蛋白酶相比，TrypLE Select 酶表现出优越的稳定性。即使在37℃下工作8周后，TrypLE Select 酶仍保持50%的活性，而仅两天后，纯化的猪胰蛋白酶活性迅速下降。
图5.TrypLE Select 酶稳定性。在不同的储存温度下，与粗猪胰蛋白酶或纯化猪胰蛋白酶相比，TrypLE Select 酶表现出优越的稳定性。即使在37℃下工作8周后，仍保留50%的酶活性。所有样品均避光储存。
图6.纯化猪胰蛋白酶稳定性。在37℃下储存的纯化猪胰蛋白酶样品中的酶活性迅速下降。
接种效率
用 TrypLE Select 酶以每孔100–200个细胞分离的细胞与用猪胰蛋白酶处理的细胞相比，具有更高的接种效率。
图7.TrypLE Select 酶可提高接种效率。用 TrypLE Select 酶分离的细胞与用猪胰蛋白酶分离的细胞相比，表现出更高的接种效率。
TrypLE 酶资源
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