长期以来，人们一直认为纯化质粒 DNA 中的内毒素会对所有细胞系的转染效率和活力产生不利影响，因此普遍采用价格昂贵的"无内毒素"质粒纯化系统，其内毒素阈值低于0.1 EU/µg。然而，最近研究已表明，只有超过 10 EU/μg 的高水平内毒素才会对标准细胞系的转染、蛋白质表达和活力产生负面影响 [1]。需要注意的是，对于敏感应用，如原代细胞或干细胞的转染，以及其他 体内 应用，需要使用阈值低于
0.1 EU/µg 的无内毒素质粒 DNA。

对于大多数转染应用，诸如 PureLink HiPure 和 PureLink Fast 低内毒素试剂盒等阴离子交换质粒纯化系统非常适合，因为它们产生范围从 0.1 至 10 EU/μg 的低水平内毒素。这些内毒素水平视为非常适于大多数转染目的。然而，对于最敏感的应用，建议使用阈值低于 0.1 EU/μg 的高级转染级无内毒素质粒 DNA。这有助确保高水平质粒纯度，并有助于尽可能减少对转染效率和活力的任何潜在不利影响。

什么是内毒素？

内毒素是存在于革兰氏阴性细菌外膜中的脂多糖类。这些分子可以在哺乳动物中导致免疫应答和炎症。内毒素可能在科学研究中带来问题，因为它们可能干扰细胞过程并导致实验结果不可靠。

下游应用的质粒纯度规范

分子级质粒分离技术通常更快、更有性价比并且充分适于不要求高纯度水平的稳健应用如克隆、核酸标记、PCR 和测序。我们的 GeneJet 质粒 DNA 纯化试剂盒充分适于分子级质粒 DNA 分离。

转染级质粒纯化技术可以用于相比分子级质粒 DNA 需要更高纯度及更高产率的应用。我们的 PureLink HiPure 质粒纯化试剂盒和 PureLink Fast 低内毒素质粒纯化试剂盒可产生更高的产量和更低的内毒素水平，用于更敏感的应用，如转染标准细胞系和体外转录。转染级质粒 DNA 也适用于所有分子级应用，如克隆或测序。

高级转染级质粒分离技术适用于最敏感的应用，但也可以用于所有分子级和转染级应用。我们的  PureLink Expi 无内毒素质粒纯化试剂盒 提供大规模、无内毒素 (<0.1 Eu/µg) 质粒快速纯化，非常适用于转染敏感性细胞系 (如原代细胞) 和 体内 实验 (基因治疗、微量注射和疫苗研究)。

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下游应用		纯度等级
分子转染高级转染
敏感性转染（如 原代细胞）   
疫苗研究   
显微注射   
基因治疗研究   
体外转录   
标准转染   
克隆   
核酸标记   
PCR   
测序   
转化   


内毒素如何影响生物学应用？

内毒素可能通过在细胞中触发免疫应答和炎症来显著影响生物学应用。这可能导致基因表达改变、细胞死亡以及实验结果受损。因此，了解内毒素如何影响下游应用以及质粒纯度需要达到何种水平至关重要，这有助于确保研究中所用的质粒 DNA 得到正确纯化，从而获得准确可靠的数据。


如何在质粒纯化期间去除内毒素？

为实现无内毒素质粒制备，采用特殊纯化方法。这些方法通常涉及使用层析技术，如阴离子交换或亲和层析，选择性地从质粒 DNA 溶液中去除内毒素。此外，还有内毒素去除试剂盒和专用色谱柱可供使用，以促进纯化过程，并确保获得高质量、无内毒素质粒 DNA。


如何测量内毒素？

通常使用鲎变形细胞裂解物 (LAL) 测定法进行内毒素定量，这种测定法依赖于鲎血细胞在内毒素存在下的凝集反应。这种测定法灵敏、准确地测量质粒 DNA 制备物的内毒素水平，从而允许研究人员测定其样品的纯度和安全性。

阅读更多的质粒纯度常见问答


参考文献
  1. Butash, KA 等人(2000) Reexamination of the Effect of Endotoxin on Cell Proliferation and Transfection Efficiency. Biotechniques 29(3): 610-614, 616, 618-619. 
相关资源
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