Cas9核酸酶-Cas9载体-赛默飞 | Thermo Fisher Scientific

适用于 CRISPR Cas9 基因编辑的 Cas9 核酸酶形式

在 CRISPR-Cas9 基因编辑实验中，Cas9 核酸酶与 gRNA 结合，并诱导特定基因组靶序列处双链断裂。要使 cas9酶发挥作用，该靶序列必须在所需断裂附近有一个原型间隔区相邻基序 (PAM) 位点。Cas9 核酸酶有多种形式可供选择，以满足您的实验设计和首选工作流程需求，实现精确 DNA 切割和基因敲除。

Cas9 核酸酶选择指南

	Cas9 蛋白	Cas9 mRNA	Cas9 质粒	Cas9 慢病毒
设计用于	大多数 CRISPR 研究和临床前应用			构建稳定的细胞系
关键优势	无需转录和翻译步骤降低脱靶效应有 3 种形式可供选择：适用于大多数常见研究应用的野生型 TrueCut Cas9 蛋白 v2 适用于对脱靶效应敏感的应用的 TrueCut HiFi Cas9 蛋白适用于临床研究应用的 CTS TrueCut Cas9 蛋白	现有的 mRNA 方案显微注射的理想选择无需转录步骤可与多个 gRNAs 共转染	现有的质粒方案可使用 GeneArt CRISPR 核酸酶载体试剂盒整合成一体式 Cas9 和 gRNA 载体	阵列式或混合型 gRNA 文库的理想选择促进多种细胞类型稳定表达 Cas9 包括人类密码子优化版本的 Cas9，具有两个核定位信号
关键限制	无	需要翻译步骤	准备工作费时费力可能会加剧脱靶效应可能会整合到基因组 DNA 中需要转录和翻译步骤	细胞对病毒转导的潜在反应
建议的递送方案	Lipofectamine CRISPRMAX 转染试剂	Lipofectamine MessengerMAX 转染试剂	Lipofectamine 3000 转染试剂	慢病毒转导
建议的递送方案	Neon 转染系统 CTS Xenon 电穿孔转染系统（用于大规模电穿孔转染）			慢病毒转导
了解更多	Cas9 蛋白方案	Cas9 mRNA 方案	Cas9 质粒方案	Cas9 慢病毒方案

多个 CRISPR-Cas9 基因编辑模式的细胞处理

与质粒和 mRNA 形式不同，用我们的 TrueGuide 合成 gRNA 和 TrueCut Cas9 蛋白形成的复合物，无需转录和翻译步骤，有助于明显提高您实验中 Cas9 酶介导的编辑效率。此外，虽然 CRISPR 质粒会在细胞中停留 72 小时以上，并且可能会加剧切割脱靶效应，但 TrueCut Cas9 蛋白在 24 小时内从细胞中清除，降低脱靶效应。

图 1.比较 CRISPR-Cas9 基因编辑形式。 Cas9 和向导 RNA 可以采用 DNA、RNA 或预形成的核糖核蛋白复合物 (RNP) 的形式递送至细胞中。使用质粒 DNA 载体（左上）时，Cas9 基因必须首先在细胞核中转录，转运到细胞质中并翻译，而 mRNA/gRNA 混合物（下）必须翻译。试剂-蛋白质复合物（右上），如 TrueCut Cas9 蛋白与我们的 TrueGuide 合成 gRNA 结合，无需这些初始步骤（即转录和翻译），从而实现更简单、更高效的基因编辑。