ELISA 酶底物

图 1.将 HRP 或 AP 等检测酶掺入 ELISA 的选项。 在检测中，目标抗原通过直接吸附到检测板进行固定化，或者首先将捕获抗体连接的孔板表面。然后可以使用酶偶联一抗（直接检测）或者匹配的一组未标记一抗和偶联二抗（检测检测）执行抗原检测。

ELISA 底物也可提供 OEM 或商业版本。咨询试剂和耗材、仪器和定制配套包解决方案。

ELISA 选择工具可以让您轻松找到适合自己的 ELISA DIY 解决方案。仅需根据向导选择合适的类别，即可得到ELISA实验所需的全部材料，包括从板子到终止液。

TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）可溶性底物检测 HRP 时会产生蓝色。它非常敏感，如果使用过多的蛋白质或抗体，可能会产生显著的背景信号。TMB 与其他 HRP 底物相比会被更快氧化，因此可以更快显色。

我们有不同的配方可供选择，具体取决于您的实验设计和灵敏度需求。

请参阅 图 2 了解不同配方和选择指南 (选项卡 1) 对您实验的最佳试剂盒的灵敏度范围的比较。

ABTS（2,2’-联氨-双-[3乙基苯并噻唑啉-6-磺酸]-二氨盐）用于检测 HRP 并生成水溶性绿色反应终产物。

对于 HRP 检测，ABTS 灵敏度低于 OPD 和 TMB 底物。如果使用OPD或TMB底物由于灵敏度较高可能会导致高背景，但显色缓慢（约20分钟）可缓解此高背景。

ABTS 提供片剂或即用型。

OPD（邻苯二胺二盐酸盐）用于检测 HRP 并生成水溶性黄橙色反应产物。反应产物最大吸收波长为492 nm。

OPD 提供粉末或片剂形式，通过溶解于稳定的过氧化物底物缓冲液或过氧化氢缓冲液中可轻松制备。

图2.HRP 不同 TMB 比色 ELISA 底物的灵敏度比较。 TMB（3,3'，5,5'-四甲基联苯胺）是 HRP 的常见显色底物，氧化后产生蓝色。然后，加入硫酸或磷酸（常用用于终止反应的溶液）后，颜色变为黄色。在左图中，在 ELISA 板检测中比较多个 TMB 底物的性能。

SuperSignal ELISA Pico 化学发光底物处理大量靶蛋白时性能卓越，容易优化，检测灵敏度高于入门级显色底物。快速生成信号，5-30分钟实现信号稳定，视 HRP 浓度而定（图3）。

SuperSignal ELISA Femto 最大灵敏度底物是可用于 ELISA 应用的最灵敏的底物之一。经过适当优化后，更低检测限为比常用显色底物低1到10个数量级。但是，未经过适当优化，蛋白质和酶容易导致高背景和负数结果。

图 3.使用 SuperSignal ELISA Pico 化学发光底物立即光产生。将生物素化 HRP 或生物素化 AP (200 pg) 添加至 NeutrAvidin 包被的白色聚苯乙烯板的单独孔中。然后在微孔板振荡器上于室温下 (RT) 孵育微孔板 30 分钟，然后用 BupH Tris 缓冲液 (货No. 28379).化学发光底物的工作溶液是根据制造商的说明制备的。SuperSignal ELISA Pico 化学发光底物号 37070) 和另一种基于鲁米诺的系统 (品牌 A) ， µL 向适当的孔板中加入了 100 μ L 每种底物工作溶液。对于基于二氧环乙烷的系统，用 1X 检测缓冲液洗涤孔。接下来，将 100 μ L 二氧环乙烷工作溶液加入到 µL 孔板中。所有板在室温下孵育 1 分钟。然后在 DyneX MLX 微量滴定板化学发光分析仪上读取孔板，每孔读取时间为 0.2 秒。在 30 分钟的时间内进行了几次读数。

QuantaBlu荧光底物具有较宽的线性检测范围和检测HRP的低浓度线性。稳定的荧光反应产物的 Emax/Amax 为325 nm/420 nm，允许执行终止、非终止和动力学检测；优于更灵敏的化学发光底物。

QuantaRed 增强型化学荧光底物是可用于 HRP 检测的最灵敏的荧光 ELISA 底物。终止反应时，荧光反应产物（resorufin）可稳定4小时，Emax/Amax 为570 nm/585 nm。红移的resorufin反应产物允许在波长下进行检测，而生物样品中可能出现的自发荧光干扰较少。

Amplex Red 试剂 (10- 乙酰基 -3 ， 7- 二羟基 吩嗪) 在存在辣根过氧化物酶的情况下与过氧化氢以 1 ： 1 的化学计量比发生反应，生成高度荧光的试卤灵。该 HRP 酶底物具有更高的稳定性，产生更少的背景，并产生通过比色吸光度或荧光发射检测的红色荧光产物 (571/585 nm 的激发 / 发射波长)。

Amplex UltraRed 试剂改善了 Amplex Red 试剂的性能，在过氧化物酶或过氧化物酶偶联检测中，每一摩尔都能提供更亮的荧光和增强的灵敏度。被氧化的Amplex UltraRed试剂显示的荧光对于pH变化也很不敏感(图10.63)。在H2O2或硫醇(例如：二硫苏糖醇，DTT)存在条件下，与Amplex Red试剂相比较，由Amplex UltraRed试剂参与反应的底物和氧化产物显示出更大的稳定性。

Amplex Red/UltraRed 终止试剂 (货 No. A33855）允许在用户确定的时间点终止荧光信号生成反应，更易于控制时间。

PNPP (p-Nitrophenyl Phosphate, Disodium Salt) is a widely used substrate for detecting alkaline phosphatase in ELISA applications.PNPP 产生黄色的水溶性反应产物，可吸收405 nm 的光。PNPP 可提供结晶性粉末、5 mg 片剂或即用型等规格。

ONPG (邻硝基苯基 - β -D- 吡喃 半乳糖苷) 用于涉及 β - 半乳糖苷酶 (β -gal) 的 ELISA 应用。ONPG 产生完全可溶性黄色产物，其在 405 nm 处具有高消光系数。尽管存在其他 β -Gal 底物， ONPG 的高溶解度，易用工作流程和显著信噪比使其成为最理想的选择。

AP 的 CSPD 和 CDP-Star 底物

CSPD 和 CDP-Star 是化学发光的1,2-二氧杂环丁烷碱性磷酸酶底物，在475 nm波长处发出最大光强的光。这些底物是“闪光”底物，仅在 15-60 分钟后随时间提供持续的最大信号，具体取决于温度。以含水缓冲液形式（分别）提供5或25 mM。添加 Sapphire-II 或 Emerald-II 发光增强剂可以提高灵敏度。

CDP-Star 底物在溶液检测中可产生更高的信号。含有 Sapphire-II 或 Emerald-II 增强剂的 CDP-Star 底物产生的信号几乎是含增强剂的 CSPD 底物产生的信号的 5 倍。对于五倍的最大灵敏度， CDP-Star 底物溶液可提供极高的信号强度和极高的灵敏度。

DynaLight AP 底物

含 RapidGlow 增强剂的 DynaLight 底物是一种即用型化学发光底物配方，经过优化后可在溶液法检测中更快获得结果。该底物被归类为闪光和辉光底物，可在 2-10分钟内提供快速且持续的最大信号。含 RapidGlow 增强剂配方的 DynaLight 底物包括1,2-二氧杂环丁烷化学发光底物和聚合物增强剂，能够通过碱性磷酸酶标记实现超灵敏免疫检测。

图4.辉光，闪光和辉光底物的信号动力学比较。比较“辉光”和“闪光和辉光”底物配方的信号强度动力学 (图 A) 和信噪比 (图 B)。在 µg 微孔板中使用 20 μ L M-280 SA Dynabeads 磁珠检测 0.04 生物素 - 碱性磷酸酶。25°C 下的信号动力学显示了 " 辉光 " (即含 Emerald-II 增强剂的 CDP-Star 底物) 和 " 闪光和辉光 " (即含 RapidGlow 增强剂的 DynaLight Substrate) 底物，分别在 ~30 分钟和 ~5 – 10 分钟条件下达到最大光发射。

ELISA 试剂盒和组分

了解我们的ELISA试剂盒规格，包括完整的，即用型试剂盒以及预优化的试剂，以设计您自己的实验方案。

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ELISA 封闭缓冲液和试剂

从多种易于使用且可靠的封闭缓冲液和试剂中进行选择，用于 ELISA 应用。

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ELISA检测仪器和设备

我们提供离心机、冷藏设备、分液器、培养箱/振荡器、微孔板、移液器和吸头，以及酶标仪和洗板机，以帮助满足您的所有 ELISA 需求。

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ELISA微孔板和塑料

从一系列具有各种表面优化的微孔板中进行选择，以捕获您选择的生物分子。

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