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利用Western Blot检测(WB检测)我们可以对细胞或者组织中特定蛋白的表达水平进行快速的评估与定量,这种方法具有无可比拟的灵敏度。因为有多种检测技术(化学发光、荧光或比色法)可选,所以你可以根据实验需求及现有仪器选择适合的方法。无论您是要进行快速成像还是精确定量、单靶点标记还是多重检测,我们为 Western Blot检测(WB检测)及下游分析提供一系列可靠的试剂及试剂盒。
![]() 化学发光检测 | ![]() 荧光检测 | ![]() 显色检测 | |
主要优势 | 检测灵敏度最高 | 一次可检测多个靶点 | 无需设备即可轻松显示印迹 |
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技术概述 | 增强型化学发光 HRP 和 AP 底物适用于皮克级至飞克级检测 | 使用一系列不同的荧光染料和标记二抗同时检测同一印迹上的多个蛋白靶点 | 使用显色试剂直接在印迹膜上显示蛋白靶点 |
信号源 | 来自酶促反应的间接信号 | 来自荧光基团的直接信号 | 来自酶促反应的间接信号 |
信号持续时间 | 有限(小时) | 持久(数周至数月) | 持久(数周至数月) |
灵敏度 | |||
一致性 | 印迹之间可能有差异,可通过使用稳定性更好的底物来减小差异 | 印迹之间具有高重复性 | 印迹之间可能有差异 |
检测 | X 光胶片和成像仪器 | 带有适合滤光片或激光的成像仪器 | 目测,无需仪器 |
定量分析 | 单通道检测使归一化具有挑战性 | 带有内参的多重检测使归一化更简单 | 单通道检测使归一化具有挑战性 |
其他因素 |
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化学发光底物是目前常用的检测工具,它相比其他检测方法具有很多优势。这些优势使化学发光成为大多数蛋白研究实验室的首选检测方法。化学发光技术可实现多次曝光以获得最佳图像。可剥离抗体并重新检测整个印迹膜,以分析另一个蛋白靶点或优化第一个蛋白靶点的检测结果。线性响应范围更宽,使得可检测和定量的蛋白质浓度范围更宽。最为重要的是,相比其他用检测方法,化学发光的检测灵敏度最高。
辣根过氧化物酶(HRP)的化学发光底物多为双组分系统,由稳定的过氧化物溶液和增强型鲁米诺溶液组成。如果要制备工作液,需要将两种组分混合在一起。当与结合有 HRP标记抗体(或其他探针)的印迹一起孵育时,化学反应生成的发射光可在425nm下,通过 X 光胶片、 CCD 成像系统和用于检测化学发光的磷光成像仪进行采集。碱性磷酸酶的化学发光底物也是一种常规选择。点击此处获取有关化学发光蛋白质印迹检测的信息。
荧光试剂越来越广泛用于蛋白质印迹检测,因为与化学发光检测相比,荧光试剂节省更多的时间,而与化学发光或显色检测系统相比,减少了化学废物。虽然荧光检测的检测限仍然不如化学发光检测的检测限低,但其具有独特的优势,即可实现在同一个印迹上同时检测多个靶点,而无需剥离和重新探测。
对多重蛋白质印迹检测不断增长的需求推动了许多新型荧光染料(例如 Alexa Fluor Plus 标记物)的开发。这些新型荧光基团比传统的荧光素和罗丹明分子更明亮且光稳定性更好,并且覆盖了更广泛的非重叠光谱。结合数字成像系统的发展,这些新型荧光基团可在蛋白质印迹检测中实现极其强大的分析功能。点击此处了解有关荧光蛋白质印迹检测的信息。
显色或沉淀底物已广泛使用多年,是一种最简单且最具成本效益的蛋白质印迹检测方法。当这些底物与适当的酶(例如碱性磷酸酶-AP 或辣根过氧化物酶-HRP)接触时,它们转化为沉淀在膜上的不溶性有色产物。由此产生的彩色条带或斑点印迹不需要特殊设备进行处理或显色。显色印迹底物有多种规格和包装形式,可产生一系列的有色沉淀物。底物的选择取决于酶标物和所需的检测灵敏度。印迹成像与胶片显影类似,先在底物中孵育,直至达到所需的显影强度。与化学发光蛋白质印迹不同,由显色底物生成的有色沉淀物不易被剥离,以再次进行检探测。因此,使反应持续进行直至达到理想的显色强度,然后停止反应,是非常重要的。
显色底物的灵敏度低,难以优化用于检测低丰度蛋白质。尽管显色反应可以持续数小时,甚至过夜,但同时背景信号也会持续生成。虽然显色底物的灵敏度不高,但其可作为高丰度蛋白质分析应用的理想选择。点击此处了解有关显色印迹检测的信息。
![]() 化学发光检测 | ![]() 荧光检测 | ![]() 显色检测 | |
主要优势 | 检测灵敏度最高 | 一次可检测多个靶点 | 无需设备即可轻松显示印迹 |
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技术概述 | 增强型化学发光 HRP 和 AP 底物适用于皮克级至飞克级检测 | 使用一系列不同的荧光染料和标记二抗同时检测同一印迹上的多个蛋白靶点 | 使用显色试剂直接在印迹膜上显示蛋白靶点 |
信号源 | 来自酶促反应的间接信号 | 来自荧光基团的直接信号 | 来自酶促反应的间接信号 |
信号持续时间 | 有限(小时) | 持久(数周至数月) | 持久(数周至数月) |
灵敏度 | |||
一致性 | 印迹之间可能有差异,可通过使用稳定性更好的底物来减小差异 | 印迹之间具有高重复性 | 印迹之间可能有差异 |
检测 | X 光胶片和成像仪器 | 带有适合滤光片或激光的成像仪器 | 目测,无需仪器 |
定量分析 | 单通道检测使归一化具有挑战性 | 带有内参的多重检测使归一化更简单 | 单通道检测使归一化具有挑战性 |
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化学发光底物是目前常用的检测工具,它相比其他检测方法具有很多优势。这些优势使化学发光成为大多数蛋白研究实验室的首选检测方法。化学发光技术可实现多次曝光以获得最佳图像。可剥离抗体并重新检测整个印迹膜,以分析另一个蛋白靶点或优化第一个蛋白靶点的检测结果。线性响应范围更宽,使得可检测和定量的蛋白质浓度范围更宽。最为重要的是,相比其他用检测方法,化学发光的检测灵敏度最高。
辣根过氧化物酶(HRP)的化学发光底物多为双组分系统,由稳定的过氧化物溶液和增强型鲁米诺溶液组成。如果要制备工作液,需要将两种组分混合在一起。当与结合有 HRP标记抗体(或其他探针)的印迹一起孵育时,化学反应生成的发射光可在425nm下,通过 X 光胶片、 CCD 成像系统和用于检测化学发光的磷光成像仪进行采集。碱性磷酸酶的化学发光底物也是一种常规选择。点击此处获取有关化学发光蛋白质印迹检测的信息。
荧光试剂越来越广泛用于蛋白质印迹检测,因为与化学发光检测相比,荧光试剂节省更多的时间,而与化学发光或显色检测系统相比,减少了化学废物。虽然荧光检测的检测限仍然不如化学发光检测的检测限低,但其具有独特的优势,即可实现在同一个印迹上同时检测多个靶点,而无需剥离和重新探测。
对多重蛋白质印迹检测不断增长的需求推动了许多新型荧光染料(例如 Alexa Fluor Plus 标记物)的开发。这些新型荧光基团比传统的荧光素和罗丹明分子更明亮且光稳定性更好,并且覆盖了更广泛的非重叠光谱。结合数字成像系统的发展,这些新型荧光基团可在蛋白质印迹检测中实现极其强大的分析功能。点击此处了解有关荧光蛋白质印迹检测的信息。
显色或沉淀底物已广泛使用多年,是一种最简单且最具成本效益的蛋白质印迹检测方法。当这些底物与适当的酶(例如碱性磷酸酶-AP 或辣根过氧化物酶-HRP)接触时,它们转化为沉淀在膜上的不溶性有色产物。由此产生的彩色条带或斑点印迹不需要特殊设备进行处理或显色。显色印迹底物有多种规格和包装形式,可产生一系列的有色沉淀物。底物的选择取决于酶标物和所需的检测灵敏度。印迹成像与胶片显影类似,先在底物中孵育,直至达到所需的显影强度。与化学发光蛋白质印迹不同,由显色底物生成的有色沉淀物不易被剥离,以再次进行检探测。因此,使反应持续进行直至达到理想的显色强度,然后停止反应,是非常重要的。
显色底物的灵敏度低,难以优化用于检测低丰度蛋白质。尽管显色反应可以持续数小时,甚至过夜,但同时背景信号也会持续生成。虽然显色底物的灵敏度不高,但其可作为高丰度蛋白质分析应用的理想选择。点击此处了解有关显色印迹检测的信息。
仅供科研使用,不可用于诊断目的。