BrdU 标记和检测方案

细胞增殖可使用胸苷类似物 BrdU（5-溴-2'-脱氧尿苷）进行测定，方法是将胸苷类似物 BrdU掺入新合成 DNA，并随后使用抗 BrdU 抗体进行检测。

制备储备溶液

1. 将 100 mg BrdU 溶于 32.5 mL 无水 DMSO 中（10 mM 储备液）
2. 将 10 μL 该储备液稀释至 10 mL 37 C 组织培养基中，以制备 10 μ L 标记液 

用 BrdU 标记细胞

1. 在合适的容器中 培养细胞，以便进行显微镜观察。
2. 从细胞中去除培养基，并用 BrdU 标记液替代 
3. 在 37°C 下孵育细胞 2 小时
4. 去除标记液，用 PBS 洗涤两次
5. 用 PBS 洗涤（3 次，每次 2 分钟）

固定，透化和酸洗涤

1. 去除 PBS ，并在各孔中加入 1 mL 的 3.7% 甲醛
2. 在室温下孵育 15 分钟
3. 用 PBS 洗涤（3 次，每次 2 分钟）
4. 去除 PBS ，并在每个孔中添加 1 mL Triton X-100 透化缓冲液
5. 在室温下孵育 15 分钟
6. 去除透化缓冲液，加入 1 mL 的 1N HCl
7. 在冰上孵育 10 分钟
8. 去除该溶液，并添加 1 mL 2N HCl
9. 在室温下孵育 60 分钟
10. 加入 1 mL 磷酸盐 / 柠檬酸缓冲液， pH 值 7.4
11. 在室温下孵育 60 分钟
12. 使用 Triton X-100 透化缓冲液洗涤（3 次，各 2 分钟）

检测掺入的 BrdU

1. 去除该溶液，并加入 1 mL 抗体染色缓冲液
2. 添加抗 BrdU 一抗
3. 在室温下孵育过夜
4. 使用 Triton X-100 透化缓冲液洗涤（3 次，各 2 分钟）
5. 加入荧光标记的二抗
6. 在室温下孵育 1 小时

图像

1. 向每个孔中加入 PBS
2. 使用适当的滤光片对细胞进行成像