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内质网 (ER) 是一种细胞器,由扁囊、小管和囊泡的网络组成,它们与细胞核包膜的外膜连续。内质网以两种形式出现:光面内质网和粗糙内质网。光面内质网的特定功能因细胞类型而异,但通常参与脂质和类固醇合成、解毒和钙稳态。粗面内质网被核糖体结合,核糖体是蛋白质合成的位点。这些蛋白可汇集在内质网中,以便在整个细胞中运输。
内质网标记物抗体可以帮助研究细胞质的形态和功能。内质网标记物抗体还可以帮助阐明蛋白质在集中于或受 ER 影响的多项任务中可能发挥的作用或作用。内质网标记物抗体特别适用于标记固定细胞。Invitrogen 内质网标记物抗体旨在可靠地检测关键的 ER 靶标。每种抗体都经过验证可用于各种应用。主要内质网标记物靶标包括:
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在正常脱石蜡的人扁桃体组织上进行 SERCA2-ATP 酶的免疫组织化学技术检测。为了暴露靶标蛋白,使用 0 mM 柠檬酸钠 (pH 6.0) 缓冲液微波炉加热 8-15 分钟进行抗原热诱导修复。在抗原修复之后,在室温下在 3% BSA-PBS 中将组织封闭 30 分钟。然后对该组织进行标记,稀释度为 1:200,使用 小鼠单克隆抗体识别 SERCA2 ATPase (货号 MA3-919) 或不使用一抗 (阴性对照) ,在加湿室中 4°C 孵育过夜。用大量 PPBST 洗涤组织,再用过氧化物酶抑制剂淬灭内源性过氧化物酶活性。使用生物素偶联的二抗和 SA-HRP 进行检测,然后使用 DAB 进行比色检测。组织用苏木精复染并用苏木精准备安装。
U2OS 细胞中的鬼笔环肽 (绿色) 和钙网蛋白 (红色) 的免疫荧光分析。经福尔马林固定的细胞在室温下用 0.1% Triton X-100 透化 10 分钟,然后用 2% BSA (货号 37525) 在 PBS + 0.1% Triton X-100 中于室温下封闭 30 分钟。细胞标记采用 钙网织蛋白多克隆抗体(货号 MA1-900) ,稀释度为在室温下探针标记细胞 在室温下孵育细胞 1 小时,采用 PBS 洗涤,然后和 1:250 稀释度的 DyLight 633 山羊抗小鼠 IgG 二抗(货号 35562) 在室温下孵育 30 分钟。肌动蛋白染色采用 DyLight 488 鬼笔环肽(货号 21833) (稀释度为 1:300,1 单位/mL 最终浓度),而细胞核 (蓝色)染色采用 Hoechst (货号 62249) ,浓度为 1 µg/mL,持续 30 分钟。图片为来自 Thermo Scientific ArrayScan VTI,20 倍放大。