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溶酶体是细胞膜结合细胞器,对细胞代谢至关重要。溶酶体中含有水解酶,能够酶解几乎所有类型的生物分子,包括细胞内外未使用的蛋白、受损细胞器和细胞质中其他不需要的物质。
作为自噬途径中的一个关键步骤,含有细胞物质的自噬体与溶酶体融合,自噬体中的内容物被溶酶体水解酶降解。此过程对于健康细胞功能是必需的,大多数细胞损伤积聚和衰老由自噬障碍导致。
溶酶体标志物抗体有助于研究溶酶体结构和功能。溶酶体标志物抗体还有助于阐明蛋白质在溶酶体集中或受溶酶体影响的多项任务中可能发挥的作用。此外,在自溶酶体内容物降解之前,溶酶体标志物抗体也可作为跟踪溶酶体与自噬体融合过程的工具。Invitrogen 溶酶体标志物抗体旨在可靠地检测关键的溶酶体靶标。每种抗体都经过验证可用于各种应用。关键的溶酶体标志物靶标包括:
在正常脱石蜡的人扁桃体组织上进行 RAB9的免疫组织化学技术检测。为了暴露靶标蛋白,使用 10 mM 柠檬酸钠(pH 6.0)缓冲液微波炉加热 8-15 分钟进行抗原热诱导修复。在抗原修复之后,在室温下在 3% BSA-PBS 中将组织封闭 30 分钟。然后对该组织进行标记,稀释度为 1:100,使用 小鼠单克隆抗体识别 RAB9(货号 MA3-067) 或不使用一抗 (阴性对照) ,在加湿室中 4°C 孵育过夜。用大量 PPBST 洗涤组织,再用过氧化物酶抑制剂淬灭内源性过氧化物酶活性。使用生物素偶联的二抗和 SA-HRP 进行检测,然后使用 DAB 进行比色检测。组织用苏木精复染并用苏木精准备安装。
使用 RAB9 抗体对 RAB9 进行免疫荧光分析显示 HeLa 细胞中的染色情况。图示为 RAB9(绿色)、用鬼笔环肽染色的 F- 肌动蛋白(红色)和用 DAPI(蓝色)染色的细胞核。细胞在腔式载玻片上生长,并在染色前用甲醛固定。不使用(阴性对照品)或使用 识别 RAB9 的抗体(货号 MA3-067) ,以 1∶200 的稀释度在 4 °C 下探测细胞过夜,用 PBS 洗涤并与 Dylight 488 偶联二抗(GAR 货 号 35552; GAM 货号 35503)孵育。照片为 60 倍放大。