聚糖分析信息

聚糖和糖蛋白分析

聚糖在膜蛋白和分泌性蛋白中扮演着多种结构性和功能性角色,在其合成过程中大多数蛋白质都会经历一定程度的糖基化。 全球监管机构,包括 FDA 和 EMA 在内,不断提高对制造商全面分析治疗药物糖基化以及证明过程如何影响聚糖成分的要求。

蛋白质生物治疗药物糖基化模式的变化已证明可影响其半衰期、稳定性、安全性和效果。 总之,聚糖分为两大组:0-连接聚糖和 N-连接聚糖。 O-连接糖基化指的是通过氧原子将低聚糖粘附至丝氨酸或苏氨酸残留基,N-连接糖基化指的是通过氮原子将低聚糖粘附至天冬酰胺酸。

60% 以上的治疗用蛋白质在加入 N- 或 O-连接聚糖进行生物合成后经过翻译后修饰。 生物治疗药物糖基化可能受到许多过程相关因素的影响,比如 pH 值、碳源、溶解氧、生产过程中的温度以及表达系统的选择。

虽然糖基化是最常见的蛋白质翻译后修饰,单从分析的角度看也是要求最高的方式。 为了保持一致的生物治疗糖基化模式,高效的制造工艺和有效的聚糖表征必不可少。 糖蛋白的完整分析可提供关于低聚糖的一级结构以及通过多种不同分析方法获得的个别糖基化部位变异的信息。

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我采用的是哪种糖基化模式? 完整糖蛋白分析

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完整糖蛋白分析用于确定糖基化的模式和程度。 由于粘附的聚糖部分具有异质性,使用高分辨率高质量精度 (HRAM) 质谱分析 (MS) 结合色谱分离可以最出色地执行完整糖蛋白分析,能够深入了解蛋白质或生物治疗药物中出现的各种糖型。


聚糖存在于哪里? 糖肽分析

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可以执行肽水平的聚糖分析,目标是获得糖基化部位的聚糖成分和肽序列。


我的药物中存在哪些聚糖,浓度是多少? 聚糖结构测定

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监测特定聚糖种类或者测定特定聚糖组的相对数量为生物治疗药物开发提供了重要信息。 由于聚糖结构复杂,所以在蛋白质释放聚糖时执行定量分析和鉴定。 N-连接聚糖通过酶处理进行释放,而 O-连接聚糖需要通过化学方法才能释放,因为不存在这种用途的酶。 聚糖没有发色团,因此对传统 LC-UV 检测响应较差;同样地,通过 LC 荧光检测进行高灵敏度分析之前通常标记荧光标签,最常见的标签为 2-氨基苯甲酰胺 (2-AB)。 MS 已成为聚糖结构解析的最重要工具之一。 但是,由于大多数聚糖不能有效电离,所以也可以执行 2-AB 标记以提高灵敏度。

AppsLab 方法库中标记的聚糖协议

立即访问适用于来自治疗性蛋白质的 2-AA、2-AB 标记 N-聚糖的 12 种以上的 IC 和 UHPLC 方法。 或者访问来自 NIBRT Ireland 的最新特色应用——通过 UHPLC-FLD 结合 MS 确认快速分析生物治疗抗体中的 N-聚糖种群。

 标记的 N-聚糖 AppsLab 方法
 特色 NIBRT 应用


我的药物实体中的糖有哪些成分? 单糖和唾液酸分析

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单糖成分,即岩藻糖、半乳糖胺、氨基葡萄糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖,通常确定为与蛋白质结合的糖单位的数量和成分,而且会影响生物治疗药物的疗效。 单糖为弱酸,在基本条件下可以使用阴离子交换色谱进行分离。 样品经过酸性水解后可释放单糖,经过色谱分离后可通过高效阴离子交换色谱与脉冲安培检测 (HPAE-PAD) 进行分析。


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类型标题产品聚焦年份
应用纲要使用 HPAE-PAD 测定生物仿制药中的单糖和唾液酸离子色谱2015 年
应用资料带有去糖基化功能的配体结合质谱免疫检测 (LB-MSIA™) 工作流程适用于治疗用抗体MSIA2015 年
应用资料HILIC——适用于糖肽的替代分离技术HPLC / UHPLC2017 年
应用资料使用生物信息学工具自动区分聚糖结构异构体生命科学质谱仪2011 年
应用资料通过 HILIC UHPLC 分析对候选生物仿制药的原研药单克隆抗体进行全面的蛋白质糖基化比较HPLC / UHPLC2017 年
应用资料通过 HPAE-PAD 在数量有限的样品中评估蛋白质糖基化离子色谱2015 年
应用资料通过 UHPLC-FLD 结合 MS 确认快速分析生物治疗抗体中的 N-聚糖种群HPLC / UHPLC2017 年
应用资料使用高效阴离子交换色谱结合脉冲安培检测 (HPAE-PAD) 分析甘露糖-6-磷酸离子色谱2010年
应用资料使用新型混合模式色谱柱和 Q Exactive 质谱仪分析蛋白质中标记和天然多糖的整合 LC/MS 工作流程工作流程2014 年
应用资料通过 UHPLC 结合荷电气溶胶检测对根据电荷、分子大小和异构体结构分离的聚糖进行无标记分析HPLC / UHPLC2015 年
应用资料在高分辨率混合模式色谱柱上分离来自糖蛋白的 2AA 标记 N-连接聚糖化学品和耗材2013 年
应用资料在高分辨率混合模式色谱柱上分离来自人类 IgG 的 2AA 标记 N-连接聚糖化学品和耗材2013 年
应用资料在新型超高分辨率混合模式色谱柱行分离来自牛胎球蛋白的 2AB 标记 N-连接聚糖化学品和耗材2013 年
应用资料使用适用于氨基糖苷类抗生素分离的 pH 值稳定的专用色谱柱分析庆大霉素化学品和耗材2015 年
应用资料使用适用于氨基糖苷类抗生素分离的 pH 值稳定的专用色谱柱分析壮观霉素化学品和耗材2015 年
应用资料测定发酵液中的碳水化合物、乙醇和乙二醇离子色谱2013 年
应用资料单克隆抗体糖基化的超快速、批次间比较HPLC / UHPLC2017 年
应用资料使用聚糖标记整合解决方案比较治疗抗体原研药物和生物相似药物的糖基化HPLC / UHPLC2018 年
应用手册高效阴离子交换色谱与脉冲安培检测 (HPAE-PAD) 联用——碳水化合物分析应用手册离子色谱2014 年
应用更新通过 HPAE-FLD 改善来自人类 α1 酸性糖蛋白的氨基苯甲酰胺 (2-AB) 标记 N-聚糖的分离,以便于分析离子色谱2016 年
应用更新HPAE-PAD 快速筛选聚糖中的唾液酸离子色谱2011 年
AppsLab通过亲水作用 UHPLC 对生物仿制候选药进行深度蛋白质糖基化比较化学品和耗材2016 年
AppsLab快速分离多克隆人类血清 IgG 中的 2-AB 标记 N-聚糖化学品和耗材2016 年
AppsLab高分辨率分离商用嵌合 IgG1 单克隆抗体 (Infliximab) 中的 2-AA 衍生化 N-聚糖化学品和耗材2016 年
AppsLab对单克隆抗体 (mAb) 中的 2-AA 标记 N-聚糖进行超快速亲水作用 UHPLC 分析化学品和耗材2016 年
文章糖生物学工具生命科学质谱仪2016 年
手册通过 HPAE-PAD 分析碳水化合物离子色谱2013 年
手册用于生物治疗药物的 Thermo Scientific 聚糖分析 加入生物制药领域的革新浪潮工作流程2015 年
电子书生物治疗药物的聚糖分析工作流程工作流程2015 年
社论革新浪潮——JJonathan Bones,NIBRT 社论采访HPLC / UHPLC2015 年
社论Glycopioneer其他2015 年
信息图使用质谱分析聚糖应了解的四大事项生命科学质谱仪2013 年
海报适用于监测单克隆抗体变体和去糖基化的自中而下法化学品和耗材2016 年
海报资料通过抗体聚糖设计的抗体药物偶联物的 Orbitrap 质谱表征生命科学质谱仪2015 年
海报资料低聚糖的 2-氨基苯甲酰胺标记: 失去了多少唾液酸?离子色谱2014 年
海报资料使用超高分辨率色谱柱和质谱仪对标记的 N-连接聚糖进行异构分离和结构识别化学品和耗材2014 年
海报资料使用 UHPLC 和 CE 对治疗用抗体进行快速和强大的 N-聚糖分析方法的开发其他2016 年
海报资料通过高效液相色谱和荷电气溶胶检测直接测量糖蛋白释放的唾液酸HPLC / UHPLC2016 年
海报资料用于分离人类 α1 酸性糖蛋白和牛胎球蛋白 2-氨基苯甲酰胺 (2AB)-标记低聚糖的 HPAE-FLD 方法离子色谱2016 年
海报资料通过 UHPLC 结合荷电气溶胶检测对根据电荷、分子大小和异构体结构分离的聚糖进行无标记分析HPLC / UHPLC2015 年
海报资料通过 UHPLC 与荷电气溶胶检测对 O-连接聚糖进行无标记分析HPLC / UHPLC2016 年
演示文档研究生物制药糖基化的分析策略工作流程2016 年
演示文档研究生物制药糖基化的六种分析策略工作流程2016 年
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技术资料回顾评价电化学响应的同行评议 HPAE-PAD 糖蛋白低聚糖分析科学文献。离子色谱2013 年
技术资料2-AB 标记的右旋糖酐分子量标准的 UHPLC 分析和未知聚糖的葡萄糖单元分配色谱数据软件2014 年
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网络讲座使用 HPAE-PAD 分析生物制药糖蛋白释放的 N-聚糖离子色谱2013 年
网络讲座使用 SimGlycan 软件基于聚糖鉴定和定量分析自动进行质谱分析生命科学质谱仪2015 年
网络讲座糖组学和糖蛋白组学面临的挑战生命科学质谱仪2015 年
网络讲座Orbitrap 可以满足各种要求: 赛默飞世尔科技的聚糖分析解决方案生命科学质谱仪2015 年
网络讲座多糖和抗体分离的革新工作流程2015 年
网络讲座糖基化抗体质谱表征的革新浪潮工作流程2015 年
白皮书适用于碳水化合物分析的 HPAE-PAD离子色谱2013 年
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应用资料用于测定单克隆抗体岩藻糖基化水平的亚单位分析方法HPLC / UHPLC2018 年
应用资料快速准确地比较生物相似药物和原研药物的生物治疗学HPLC / UHPLC2018 年

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