中药有效成分提取

传统中药有效成分的提取多采用煎煮法、浸渍法、索氏提取、超声提取等方法,但往往存在效率低,耗溶剂,时间长等问题,ASE150/350加速溶剂萃取仪利用高温(40-200 ℃)和高压(1500 psi)条件,可以在“无人值守”的状态下,对批量样品进行快速充分的序列溶剂优化提取,保证更高的萃取回收率,更高的提取通量,且环保性佳,操作便利。

含量测定与指纹图谱

中药里的有效成分、特征成分含量测定,不同批次、产地或前处理的中药样品指纹图谱的相似度比较仍然是目前中药及其制剂质控评估的重要手段。赛默飞除了提供常规 HPLC 和 UHPLC 的技术手段外,还能提供独家的双三元液相技术(DGLC)和 CAD 通用型质量检测器,以及高压离子色谱系统,可以为中药质量控制开拓“一法多用,一测多评”的新颖方法学研究。

中药基质成分复杂异常,化合物性质千差万别,难以获得全面的对照品,加之中药复方配伍的多样性都给中药质控分析带来极大挑战,难以用单一方法来解决所有问题。

双三元的技术优势及应用案例

赛默飞双三元液相技术将两个三元梯度泵头整合于一个模块中,利于开发各种高级应用,可提高样品分析通量,简化前处理,深度成分剖析,以及 “一法多用”的质控方法的拓展。

双三元液相系统

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  • 柱温箱:可安装两个阀(六通或十通)用作多种高级应用
  • 检测器:VWD,DAD,FLD,CAD,RI,ECD,MSQ

泵:双三元泵

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  • 两个三元梯度泵头 整合于一个模块中
  • 可以作为独立的泵模块使用,也可以协调同步使用

资料下载

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电雾式检测器的技术特点及应用案例

CAD电雾式检测器采用新型设计原理,对大多数化合物提供完全不依赖于分子结构的响应一致性和低检测限。可以对生物碱、皂苷及糖苷、内酯类、胆酸、萜类等化合物检测提供“一测多评”的新型质控方案。

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CAD Veo 电喷雾检测器

通用型的CAD检测器适用于非挥发性物质和许多半挥发性中药成分的检测,具有灵敏度高(低至ng 级), 重现性好(重复进样响应值RSD一般低于2%),响应一致性(同浓度不同化合物响应值的RSD仅为10.7%)的优势,非常适合无中药对照品时“一测多评”的研究。

应用文献

赛默飞提供从经典Ultimate U3000 液相到高端Vanquish 液相的全套色谱平台,结合性能优越的Hypersil,Accucore,Syncronis,Acclaim 等色谱柱和HPLC到UHPLC的色谱方法无缝转换工具,帮助客户轻松解决从常规含量测定,到指纹图谱相似度分析等应用问题。

具有最佳分离性能的Vanquish UHPLC配备了超高检测灵敏度及超宽动态范围的DAD长光程流通池和零死体积Viper接头,能获取更高的峰容量,并更有效捕捉中药里的微量组分,可帮助客户获得更精细的中药指纹图谱和更准确的相似度比较结果。

资料下载

中药里的单糖和多糖作为活性成分,日益成为人们关注的焦点。然后传统测糖的气相色谱法、液相色谱法和毛细管电泳法大多需要经过复杂的衍生化处理,且灵敏度和分离效果不理想。赛默飞的离子色谱法无需衍生即可分离测定样品中的糖类化合物,且分离度好,检测灵敏度高;电解连续再生,无需淋洗液配制的“只加水”技术为客户提供最便捷的单糖质控方案。

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中药基质成分复杂异常,化合物性质千差万别,难以获得全面的对照品,加之中药复方配伍的多样性都给中药质控分析带来极大挑战,难以用单一方法来解决所有问题。

双三元的技术优势及应用案例

赛默飞双三元液相技术将两个三元梯度泵头整合于一个模块中,利于开发各种高级应用,可提高样品分析通量,简化前处理,深度成分剖析,以及 “一法多用”的质控方法的拓展。

双三元液相系统

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  • 柱温箱:可安装两个阀(六通或十通)用作多种高级应用
  • 检测器:VWD,DAD,FLD,CAD,RI,ECD,MSQ

泵:双三元泵

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  • 两个三元梯度泵头 整合于一个模块中
  • 可以作为独立的泵模块使用,也可以协调同步使用

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电雾式检测器的技术特点及应用案例

CAD电雾式检测器采用新型设计原理,对大多数化合物提供完全不依赖于分子结构的响应一致性和低检测限。可以对生物碱、皂苷及糖苷、内酯类、胆酸、萜类等化合物检测提供“一测多评”的新型质控方案。

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CAD Veo 电喷雾检测器

通用型的CAD检测器适用于非挥发性物质和许多半挥发性中药成分的检测,具有灵敏度高(低至ng 级), 重现性好(重复进样响应值RSD一般低于2%),响应一致性(同浓度不同化合物响应值的RSD仅为10.7%)的优势,非常适合无中药对照品时“一测多评”的研究。

应用文献

赛默飞提供从经典Ultimate U3000 液相到高端Vanquish 液相的全套色谱平台,结合性能优越的Hypersil,Accucore,Syncronis,Acclaim 等色谱柱和HPLC到UHPLC的色谱方法无缝转换工具,帮助客户轻松解决从常规含量测定,到指纹图谱相似度分析等应用问题。

具有最佳分离性能的Vanquish UHPLC配备了超高检测灵敏度及超宽动态范围的DAD长光程流通池和零死体积Viper接头,能获取更高的峰容量,并更有效捕捉中药里的微量组分,可帮助客户获得更精细的中药指纹图谱和更准确的相似度比较结果。

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中药里的单糖和多糖作为活性成分,日益成为人们关注的焦点。然后传统测糖的气相色谱法、液相色谱法和毛细管电泳法大多需要经过复杂的衍生化处理,且灵敏度和分离效果不理想。赛默飞的离子色谱法无需衍生即可分离测定样品中的糖类化合物,且分离度好,检测灵敏度高;电解连续再生,无需淋洗液配制的“只加水”技术为客户提供最便捷的单糖质控方案。

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中药成分检定指纹图谱

赛默飞可以提供完整的中药分析解决方案,涵盖了从药用植物天然产物分析到中药临床组学分析等应用领域,力争保证中药质量,阐明作用机理,为中医药临床价值贡献自己的一份力量。

黄芩苦寒清泄,善清热燥湿、泻火解毒,是本次战“疫”的关键药味之一,频频出现中医处方中,如金花清感颗粒、防风通圣丸、清肺排毒汤、蓝芩口服液等,其中可与金银花共清上焦肺卫之热,作为臣药出现在透解祛瘟颗粒处方,以增强两味君药山慈菇、连翘清解疫毒、化痰散结之功效。从黄芩配方颗粒特征图谱,可以大致看出其关键的药效物质包含:

(一)特征图谱分析:

峰2(S):黄芩苷;峰5:汉黄芩苷;峰6:黄芩素;峰7:汉黄芩素
图1 黄芩供试品特征色谱图

(二)含量测定分析

表1 黄芩供试品含量测定结果

样品名称/编号保留时间
/min
峰面积
/mAU*min
含量计算
/μg/mL
每1g配方颗粒含黄芩苷
实验测定值/mg
对照品14.11.464612.32191.35
(规定值:148.0~274mg)
24.11.4565
供试品14.11.831815.46
24.11.8341

(三)重复性考察

样品中黄芩苷6针重复性考察中保留时间RSD为0.13%,峰面积RSD为0.52%,符合方法学要求。

黄芪补气升阳,固表止汗,利水消肿;附子回阳救逆,温肾助阳,祛寒止痛。黄芪具有生发之性,善于益气固表,止汗固脱,伍以附子,相使为用,温阳益气,回阳救逆,固表止汗益彰。现代药理研究表明,附子与黄芪配伍使用,LD50值显著增大,表明黄芪对附子有显著的解毒作用。

本实验利用Q Exactive高分辨质谱对附子单煎组、黄芪单煎组、附子黄芪合煎组、附子黄芪混合的化学成分进行系统分析,以期为黄芪对附子的解毒机理提供物质基础。



图 1. 赛默飞基于液相色谱及质谱联用技术的配方颗粒成分分析解决方案

由下图2中可知:正负离子数据中,QC样品(选择QF合煎组)聚合度非常好,证明整个样品采集过程中,仪器状态很稳定;四组样品间在PCA上的相对位置一致,分列不同象限中,差异较大;单煎混合组和合煎组之间聚集在两个区域,表示样本间有一定差异。

利用Compound Discoverer软件,结合标准中药数据库及公开数据库模式对样品中的化合物进行鉴定,共鉴定179种可能的成分,主要为氨基酸、生物碱、黄芪皂苷、黄酮类。按照p≤0.05, FC ≥2为标准选择差异性代谢物,附子黄芪合煎组中可见乌头碱、新乌头碱等双酯型乌头碱含量降低。文献报道,双酯型乌头碱是附子中主要毒性成分,表明合煎组的减毒机制。

黄精为百合科植物滇黄精 Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.、黄精Polygonatum sibiricum Red.或多花黄精Polygonatum cyrtonema Hua的燥根茎。传统医学认为黄精性平、味甘, 入脾、肾、肺经, 具有补肾益精、滋阴润燥等功效。生黄精具有麻味, 生品服用时, 口舌麻木, 刺激咽喉。经过炮制后, 消除其刺激性及副作用, 糖性变浓裂, 口感好, 利于服用。

本实验利用Q Exactive Focus分析炮制对黄精化学成分产生的影响,为今后阐明黄精炮制作用机制及临床应用奠定基础



图1. 样品在正负离子模式下的总离子流图

如下图2所示,黄精经过炮制后可见明显的成分差异。通过火山图分析差异性成分可知黄精炮制后正离子模式下可见385个化合物含量显著降低,326个化合物显著增加;负离子模式下可见287个化合物含量显著降低,231个化合物显著增加。


图2. 正负离子模式下的火山图

结合Compound Discoverer软件和中药数据库,通过二级数据库自动匹配的功能,从黄精与酒黄精中共鉴定出104种可能的化学成分,主要为氨基酸类、生物碱类、有机酸类成分。此外还鉴定出87个可能性的皂苷类成分。

黄精炮制后5-羟甲基糠醛的含量显著增加,氨基酸及生物碱类成分显著降低。皂苷类成分发生降解,生成次级苷和苷元。此现象可为黄精炮制的药理和毒理研究提供了一定的物质理论基础。

黄芩苦寒清泄,善清热燥湿、泻火解毒,是本次战“疫”的关键药味之一,频频出现中医处方中,如金花清感颗粒、防风通圣丸、清肺排毒汤、蓝芩口服液等,其中可与金银花共清上焦肺卫之热,作为臣药出现在透解祛瘟颗粒处方,以增强两味君药山慈菇、连翘清解疫毒、化痰散结之功效。从黄芩配方颗粒特征图谱,可以大致看出其关键的药效物质包含:

(一)特征图谱分析:

峰2(S):黄芩苷;峰5:汉黄芩苷;峰6:黄芩素;峰7:汉黄芩素
图1 黄芩供试品特征色谱图

(二)含量测定分析

表1 黄芩供试品含量测定结果

样品名称/编号保留时间
/min
峰面积
/mAU*min
含量计算
/μg/mL
每1g配方颗粒含黄芩苷
实验测定值/mg
对照品14.11.464612.32191.35
(规定值:148.0~274mg)
24.11.4565
供试品14.11.831815.46
24.11.8341

(三)重复性考察

样品中黄芩苷6针重复性考察中保留时间RSD为0.13%,峰面积RSD为0.52%,符合方法学要求。

黄芪补气升阳,固表止汗,利水消肿;附子回阳救逆,温肾助阳,祛寒止痛。黄芪具有生发之性,善于益气固表,止汗固脱,伍以附子,相使为用,温阳益气,回阳救逆,固表止汗益彰。现代药理研究表明,附子与黄芪配伍使用,LD50值显著增大,表明黄芪对附子有显著的解毒作用。

本实验利用Q Exactive高分辨质谱对附子单煎组、黄芪单煎组、附子黄芪合煎组、附子黄芪混合的化学成分进行系统分析,以期为黄芪对附子的解毒机理提供物质基础。



图 1. 赛默飞基于液相色谱及质谱联用技术的配方颗粒成分分析解决方案

由下图2中可知:正负离子数据中,QC样品(选择QF合煎组)聚合度非常好,证明整个样品采集过程中,仪器状态很稳定;四组样品间在PCA上的相对位置一致,分列不同象限中,差异较大;单煎混合组和合煎组之间聚集在两个区域,表示样本间有一定差异。

利用Compound Discoverer软件,结合标准中药数据库及公开数据库模式对样品中的化合物进行鉴定,共鉴定179种可能的成分,主要为氨基酸、生物碱、黄芪皂苷、黄酮类。按照p≤0.05, FC ≥2为标准选择差异性代谢物,附子黄芪合煎组中可见乌头碱、新乌头碱等双酯型乌头碱含量降低。文献报道,双酯型乌头碱是附子中主要毒性成分,表明合煎组的减毒机制。

黄精为百合科植物滇黄精 Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.、黄精Polygonatum sibiricum Red.或多花黄精Polygonatum cyrtonema Hua的燥根茎。传统医学认为黄精性平、味甘, 入脾、肾、肺经, 具有补肾益精、滋阴润燥等功效。生黄精具有麻味, 生品服用时, 口舌麻木, 刺激咽喉。经过炮制后, 消除其刺激性及副作用, 糖性变浓裂, 口感好, 利于服用。

本实验利用Q Exactive Focus分析炮制对黄精化学成分产生的影响,为今后阐明黄精炮制作用机制及临床应用奠定基础



图1. 样品在正负离子模式下的总离子流图

如下图2所示,黄精经过炮制后可见明显的成分差异。通过火山图分析差异性成分可知黄精炮制后正离子模式下可见385个化合物含量显著降低,326个化合物显著增加;负离子模式下可见287个化合物含量显著降低,231个化合物显著增加。


图2. 正负离子模式下的火山图

结合Compound Discoverer软件和中药数据库,通过二级数据库自动匹配的功能,从黄精与酒黄精中共鉴定出104种可能的化学成分,主要为氨基酸类、生物碱类、有机酸类成分。此外还鉴定出87个可能性的皂苷类成分。

黄精炮制后5-羟甲基糠醛的含量显著增加,氨基酸及生物碱类成分显著降低。皂苷类成分发生降解,生成次级苷和苷元。此现象可为黄精炮制的药理和毒理研究提供了一定的物质理论基础。

小结:赛默飞高效液相色谱及质谱完全可以满足药用植物、中药材、饮片、配方颗粒、中成药特征图谱及含量测定的实验需要,广泛用于质量检测一线,为药品有效性保驾护航。

数据合规性管理

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