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细胞裂解是提取蛋白用于质谱应用的第一步。可能需要进行分馏以富集目标蛋白或研究蛋白定位。这里介绍的试剂盒方便、易于使用,并且已经过验证,可用于 Thermo Scientific 质谱仪的下游分析。它们包括总蛋白提取或从特定细胞组分分离蛋白的选项。Thermo Scientific EasyPep Mini MS 样品制备试剂盒 提供预先配制的试剂和稳健的方法,可在 3 小时内制备可用于 MS 分析的高质量样品。
使用该快速质谱样品制备试剂盒在 2-4 小时内进行蛋白提取、消化和肽清理。
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Thermo Scientific EasyPep mini MS 样品制备试剂盒 | Mem-PER Plus 膜蛋白提取试剂盒 | 亚细胞蛋白分离试剂盒 用于培养细胞 | |
分离组分 | 主要是细胞溶质 | 整合蛋白和膜相关蛋白 | 细胞核、细胞质、细胞膜、细胞骨架、染色质结合 |
样品处理量 | 20 份 10-100 µg 细胞团块或组织样品 | 50 份样品 每个包含 500 万个细胞 | 50 份样品 每个包含 200 万个细胞 (20 µL 包装) |
样品处理时间(预消化) | <30 分钟 | 1 小时 | 2-3 小时 |
是否包括消化蛋白酶? | 是 | 否 | 否 |
总样品制备时间 | 1.5-3.5 小时 | 24-48 小时 | 24-48 小时 |
使用 TMTsixplex 试剂对不同亚细胞组分中标及物蛋白(Hsp90 和组蛋白 3)相对于全细胞裂解物的蛋白质富集进行代表性定量。红色条显示独特标记蛋白的 TMT 试剂报告离子的相对强度。使用 Thermo Scientific 培养细胞亚细胞蛋白分馏试剂盒(货号 78840)制备亚细胞组分。
使用 Mem-PER Plus 试剂盒(货号 89842)提取免疫沉淀的 Na+/K+-ATPase 转运复合物,通过 LC-MS/MS 鉴定肽。 样品根据试剂盒方案进行溶液消化处理,并在 Orbitrap Fusion 质谱仪上进行分析。
蛋白 | 肽序列 | Xcorr 值 |
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Na+/K+ 转运 ATPase 亚基 β-1 | VAPPGLTQIPQIQK | 2.67 |
VGNVEYFGLGNSPGFPLQYYPYYGK | 4.81 | |
AYGENIGYSEK | 2.52 | |
SYEAYVLNIVR | 3.17 | |
Na+/K+ 转运 ATPase 亚基 α-1 | LSLDELHR | 2.20 |
QGAIVAVTGDGVNDSPALK | 4.03 | |
NIAFFSTNCVEGTAR | 3.29 | |
SPDFTNENPLETR | 4.46 | |
TSATWLALSR | 3.18 | |
AVFQANQENLPILK | 2.01 |
仅供科研使用,不可用于诊断目的。