肽图分析

快速、准确的蛋白质序列测定

肽图分析是生物治疗药物表征过程中的关键步骤。通过蛋白质消化到其组成肽的生物药物的所谓“自下而上”的表征是必要的,能够确保生物药物分子的完整序列覆盖。

从药物发现和开发到临床试验阶段再到生物生产和 QA/QC,肽图分析仍然是关键分析方法。我们提供创新技术的独特组合,包括从头到尾的工作流程,旨在实现快速、可靠、可重现和易于使用的方法。

在蛋白质药物产品的质控要求中,需要对蛋白氨基酸序列进行确证,对相关修饰进行鉴定以及定量——即肽图分析。肽图的液质实验流程主要包括:蛋白的变性、二硫键的还原与烷基化、以及蛋白酶酶解(通常使用胰蛋白酶 Trypsin)、液质联用数据采集、数据处理几个步骤( 图1 ) 。在这个流程中,Orbitrap 型质谱以其超高分辨、高质量精度、高灵敏、高稳定性成为业内推崇的质谱分析平台。除此之外,考虑到生物制药应用的特殊需求, 根据蛋白药物质谱分析特点,Thermo Fisher与世界级制药领军企业Amgen联合开发了Biopharma Finder软件。实际上,Biopharma Finder来源于Amgen内部的自制的肽图分析软件,因此其功能设计从一开始就听从了一线分析人员的切实需求, 而Thermo Fisher的加入,则使软件底层对质谱数据处理的性能大大提高。因此,Biopharma Finder一经公开发布,就受到了业内的极大关注与好评。

除最基本的肽段序列确认、覆盖率分析、修饰位点鉴定与定量、错配二硫键发现、图谱对比、CID/HCD/ETD碎片解析等功能外,Biopharma Finder还独具未知修饰发现、氨基酸突变查找功能。这两项功能可以帮助大家快速发现序列变异,避免可能出现的巨大的质量风险。不仅如此,Biopharma Finder还有更多贴心的功能设计,如内置了CHO细胞系糖型,并可一键选择进入糖肽分析流程;再如,除具有肽段鉴定可信度评价功能外,还可智能显示多肽的理论质谱碎片,并用于与实验图谱直观对比,以辅助分析,并可快速提高分析员质谱解析水平。这些功能不但减少工作强度,也降低了对分析员理解质谱数据深度的要求。更具情怀的是,对于氨基酸固定修饰设置,不同于其它类似软件(固定修饰只可精确至某一类氨基酸),在Biopharma Finder中,可以精确到特定的某个氨基酸位点。此功能对于蛋白药的某些特殊分析需求提供了极大的便利。

肽图分析工作流程

Peptide mapping workflow

蛋白质消化

快速且可重现的标准化蛋白质消化

Thermo Scientific™ SMART Digest™ 套件是生物制药和蛋白质研究样品制备领域的重大进步,采用固定化胰蛋白酶,能够按照兼容自动化操作的格式,快速简单地提供高重现性、高灵敏度和出色数据质量的蛋白质消化。

肽分离

高分辨率反相肽分离

Thermo Scientific™ Acclaim™ VANQUISH™ C18 UHPLC 色谱柱 建议用于生物治疗性蛋白质的肽图分析,可提供优异的分离性能,有助于确保尖锐峰形。这些色谱柱的特点是采用金属含量极低的超纯硅胶基质,从而最大限度减小拖尾效应并获得对称峰形。

可重现、易于使用的 UHPLC

新款 Thermo Scientific™ Vanquish™ Flex UHPLC 平台为生物兼容性最先进二元或四元溶剂的混合提供最终解决方案。Vanquish Flex 平台设计用于在肽色谱分析中提供准确度、精密度和灵敏度的新基准。通过坚如磐石的保留时间,您可以可靠地获得发现、开发和 QC 环境中每个肽的鉴定结果。

与 DAD、VWD 和质谱检测无缝兼容且完全兼容 Thermo Scientific™ Chromeleon™ CDS 软件,让此款 UHPLC 系统堪称整个药物开发流程的最佳选择。

肽质谱仪

肽分析的金标准

一款适用于肽图分析和完整表征的质谱仪。基于 Orbitrap 质谱仪的 Thermo Scientific™ Q Exactive™ BioPharma 平台可以为市售功能最强大的台式肽图分析仪器添加优异的变性和原生 MS 完整分析以及亚基的自上而下/自中而下分析功能。

与 Thermo Scientific™ BioPharma Finder™ 软件配合使用时,可为生物治疗药物表征提供完整的硬件和软件集成解决方案。

肽图分析软件

集成的自下而上分析与完整质谱表征

使用Thermo Scientific™ BioPharma Finder™ 集成软件可节约时间并鉴别更多物质。简单的软件工作流程可以指导您的生物治疗药物表征路径,提供全面覆盖,包括肽序列验证以及所有变体和修饰的鉴定。

符合要求的 LC 和 LC-MS 软件

使用 Thermo Scientific™ Chromeleon™ 7.2 色谱分析数据系统 (CDS) 软件可以让您的实验室工作流程更加合理。此软件可以为符合 GxP 生物制药生产和 QA/QC 环境提供卓越的仪器控制、自动化和数据处理性能。

从方法创新到最终报告——在企业环境下进行您的常规 UHPLC 或 LC-MS 肽图分析。

蛋白质消化

快速且可重现的标准化蛋白质消化

Thermo Scientific™ SMART Digest™ 套件是生物制药和蛋白质研究样品制备领域的重大进步,采用固定化胰蛋白酶,能够按照兼容自动化操作的格式,快速简单地提供高重现性、高灵敏度和出色数据质量的蛋白质消化。

肽分离

高分辨率反相肽分离

Thermo Scientific™ Acclaim™ VANQUISH™ C18 UHPLC 色谱柱 建议用于生物治疗性蛋白质的肽图分析,可提供优异的分离性能,有助于确保尖锐峰形。这些色谱柱的特点是采用金属含量极低的超纯硅胶基质,从而最大限度减小拖尾效应并获得对称峰形。

可重现、易于使用的 UHPLC

新款 Thermo Scientific™ Vanquish™ Flex UHPLC 平台为生物兼容性最先进二元或四元溶剂的混合提供最终解决方案。Vanquish Flex 平台设计用于在肽色谱分析中提供准确度、精密度和灵敏度的新基准。通过坚如磐石的保留时间,您可以可靠地获得发现、开发和 QC 环境中每个肽的鉴定结果。

与 DAD、VWD 和质谱检测无缝兼容且完全兼容 Thermo Scientific™ Chromeleon™ CDS 软件,让此款 UHPLC 系统堪称整个药物开发流程的最佳选择。

肽质谱仪

肽分析的金标准

一款适用于肽图分析和完整表征的质谱仪。基于 Orbitrap 质谱仪的 Thermo Scientific™ Q Exactive™ BioPharma 平台可以为市售功能最强大的台式肽图分析仪器添加优异的变性和原生 MS 完整分析以及亚基的自上而下/自中而下分析功能。

与 Thermo Scientific™ BioPharma Finder™ 软件配合使用时,可为生物治疗药物表征提供完整的硬件和软件集成解决方案。

肽图分析软件

集成的自下而上分析与完整质谱表征

使用Thermo Scientific™ BioPharma Finder™ 集成软件可节约时间并鉴别更多物质。简单的软件工作流程可以指导您的生物治疗药物表征路径,提供全面覆盖,包括肽序列验证以及所有变体和修饰的鉴定。

符合要求的 LC 和 LC-MS 软件

使用 Thermo Scientific™ Chromeleon™ 7.2 色谱分析数据系统 (CDS) 软件可以让您的实验室工作流程更加合理。此软件可以为符合 GxP 生物制药生产和 QA/QC 环境提供卓越的仪器控制、自动化和数据处理性能。

从方法创新到最终报告——在企业环境下进行您的常规 UHPLC 或 LC-MS 肽图分析。

肽图分析专题视频

了解有关最新的色谱分析、质谱分析和软件如何加速 Alexion Pharmaceuticals, Inc. 决策制定的信息。

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