V5标签源自一种小表位 (Pk) ，该表位存在于猿猴病毒 5 型 (SV5) 家族的副黏病毒的 P 和 V 蛋白上。V5 标签在使用时通常使用全部 14 个氨基酸 (GKPIPNPLLGLDST)，但也可使用较短的 9 氨基酸 (IPNPLGLD) 序列。V5 标签抗体为检测和纯化带标签靶蛋白提供了一种可靠方法，无需依赖蛋白特异性抗体或探针。我们的 V5 标签抗体设计用于可靠检测重组 V5 标签蛋白。每种抗体都经过验证可用于各种应用。

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应用
可靠检测和纯化 V5 标签靶蛋白，无需依赖蛋白特异性抗体或探针。

对瞬时过表达 V5-His/LacZ 的 HEK-293 细胞进行 V5 标签的免疫荧光分析。 用 4% 多聚甲醛固定细胞 15 分钟，用 0.25% 的 Triton X-100 透化 10 分钟，然后用 5% BSA 在室温下封闭 1 小时。细胞使用 V5 标签单克隆抗体 (2F11F7)（货号：号 377500） 在1% BSA中以 1∶500 的稀释度进行标记，并在室温下孵育 3 小时，然后用 兔抗小鼠 IgG (H+L) 交叉吸附二抗 Alexa Fluor 488（货号：A28175） 以 1:400 的稀释度进行标记，并在室温下孵育 30 分钟（图 a：绿色）。细胞核（图 b：蓝色）使用 SlowFade Gold Antifade Mountant DAPI (S36938) 染色。F 肌动蛋白（图 c：红色）使用Alexa Fluor 594 Phalloidin（货号：A12381） 染色。图 d 是显示细胞质定位的合并图像。图 e 是未转染的 HEK-293 细胞。

对瞬时过表达 V5-His-LacZ 的 HEK-293 细胞进行 V5 标签的流式细胞术分析。使用 70％ 乙醇固定细胞 10 分钟，使用 0.25％ Triton™ X-100 透化 20 分钟，并使用 5％ BSA 在室温下封闭 1 小时。细胞使用 V5 标签单克隆抗体 (2F11F7)（货号：377500，红色直方图）或用小鼠同种型对照品（粉色直方图）在 2.5% BSA 中以 1∶250 的稀释度标记。在室温下孵育 3 小时后，用 兔抗小鼠 IgG (H+L) 交叉吸附二抗 Alexa Fluor 488（货号：A11059） 以 1:400 的稀释度在室温下标记 30 分钟。使用 Attune 声波聚焦流式细胞仪采集并分析每个样品的 10,000 个代表性细胞。紫色直方图表示未染色的对照细胞，绿色直方图表示不加一抗的对照细胞。

Flow cytometry detection of V5 tag using V5 Tag mouse monoclonal primary antibody
Western blot analysis of V5 using V5 epitope tag polyclonal antibody

V5 标签的蛋白免疫印迹分析。通过将 12Tag 转染的 25 μ L 293T 细胞上样至 SDS 聚丙烯酰胺凝胶上，进行分析。将蛋白质转印到 PVDF 膜上，并在 4°C 下过夜封闭。膜使用 V5 标签多克隆抗体（货号：Pa1-993） 以 1∶2,000 的稀释度在 4°C 下过夜探查，随后用 TBST 洗涤，并在室温下避光用 HRP 偶联二抗孵育 1 小时。使用 Pierce ECL Plus 蛋白免疫印迹底物（货号：32132）进行化学发光检测。结果显示有 ~45 kDa 的条带。

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