HA 标签抗体

使用经 HA 标签的组蛋白 H3 载体转染或未转染（泳道 4） HEK-293T 细胞的 90 µg（泳道1），60 µg（泳道2），30 µg（泳道3）全细胞裂解物进行蛋白质印迹分析。印迹使用 HA 标签单克隆抗体 （2-2.2.14）（货号 26183，0.2 µg/mL）进行孵育并使用山羊抗兔 IgG （H+L）超克隆重组二抗，HRP （货号 A28177，0.4 µg/mL，1:2500 稀释）进行化学发光检测。在转染样品中观察到对应于 HA 标签组蛋白 H3 的 ~17 kDa 条带。 使用 NuPAGE 10 % Bis-Tris，1.0 mm 迷你蛋白凝胶，12 孔（货号 NP0302BOX）、XCell SureLock 电泳系统（货号 EI0002）和Novex Sharp 预染蛋白标准品（货号LC5800）对已知数量的蛋白质样品进行电泳。然后使用 iBlot 2 凝胶转移装置（货号 IB21001）将分离的蛋白质转印到硝酸纤维素膜上。结合iBind Flex Western Starter Kit（货号 SLF2000S）用相关的一抗和二抗进行膜孵育。使用Pierce ECL Western Blotting 底物（货号 32106）进行化学发光检测。

使用经HA 标签组蛋白 H3 载体转染的 HEK-293 细胞进行 HA 标签免疫荧光分析。48 小时后，将细胞用 4％ 多聚甲醛固定 10 分钟，用 0.1％ Triton X-100 透化 15 分钟，并在室温下用 2% BSA 封闭 1 小时。用 0.1% BSA 中浓度为 2 μg/mL 的 HA 标签单克隆抗体（2-2.2.14）（货号 26183）标记细胞，在 4 摄氏度下孵育过夜，然后用 山羊抗小鼠 IgG（H+L）高度交叉吸附的二抗 ，Alexa Fluor Plus 488（货号 A32723）以 1:2000 稀释比在室温下标记 45 分钟（图 A：绿色）。细胞核 (图 b：蓝色) 用 ProLong Diamond 抗淬灭封片剂 ，带DAPI（货号 P36962）进行染色。F 肌动蛋白（图 c红色）采用罗丹明鬼笔环肽（货号 R415，1:300）进行染色。图 d 代表合并图像，表示细胞核的定位情况。图 e 表示未转染的对照细胞， 图 f 代表无一抗进行背景评估的细胞。这些图像是在放大60倍的情况下采集的。