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在生物制药研发过程中,新型药物的设计和筛选都是通过已知的药物靶点来完成的,因此对药物靶点的筛选就成为药物开发过程中的分析系统和常规PCR 系统,对靶点筛选中常用的SNP、CNV、基因突变、 融合、插入和缺失进行检测,尤其芯片技术结合高通量测序技术还可以高效快速地对大样本进行检测, 大大节约了靶点筛选的时间和成本。还可以运用质谱技术对代谢组学和蛋白组学中相关基因的表达差异 性直接进行筛选,直接作为候选靶点研究。
全自动化减少人为因素造成的差异性,省时省力
测序和片段分析的金标准
可扩展性、简便性和测序速度,适合于每一个实验室
Ion Torrent™ 个人化操作基因组测序仪(PGM™),设计配合 革新性的半导体芯片技术,使整个平台具有极高的扩展性和 快速完成测序的性能。
简单、重复性好、全自动的模板制备和芯片上样
Ion Chef™ 系统简化了Ion Proton™ 和Ion PGM™ 系 统的流程,为模板制备和芯片上样提供了一个全自动 的高通量解决方案。
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3500 系列仪器优势
miRNA 模拟物和抑制剂文库
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Silencer Select siRNA 文库
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LentiPool CRISPR 文库
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LentiArray CRISPR 文库
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简介
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化学修饰的合成核酸,可用于 模拟成熟miRNA,或者结合并 抑制内源
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超强siRNA 敲除基因表达
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慢病毒表达载体中的 gRNA 混合文库,提供 了强效的导入方法,可 以在同一试管内实现完 全的基因敲除
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慢病毒表达载体中的gRNA 阵列文库,提供了强效的导 入方法,可以在同一试管内 实现完全的基因敲除
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RNA 类型
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miRNA 寡核苷酸
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siRNA 寡核苷酸
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全长gRNA
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全长gRNA
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作用机制
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内源性RNA 诱导沉默复合体 (RISC)
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内源性RNA 诱导沉默复合 体 (RISC)
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Cas9 核酸内切酶介导 的插入缺失形成
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Cas9 核酸内切酶介导的插入 缺失形成
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对基因表达的影响
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瞬时抑制
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瞬时抑制
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永久且完全的基因敲除
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永久且完全的基因敲除
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作用时间
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2-3天
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2-3天
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2-4天
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2-4天
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种属
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人、小鼠、大鼠
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人、小鼠、大鼠
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人
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人
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形式
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阵列或混合
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阵列或混合
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混合、即用型慢病毒
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阵列、即用型慢病毒或含有 慢病毒载体的细菌甘油储液
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适合体外RNAi 应用的超强siRNA 可以高效敲除基因表达,是研究各种细胞类型中蛋白质功能的很好的途径。 Invitrogen™ Silencer ™ 和Silencer ™ Select siRNA 文库,提供融合了siRNA 设计、脱靶效应预测算法 和化学修饰方面最新进展研究,可改善链偏差,加快各种基因类别的功能基因组筛选,且可保证获得的 高准确度和高精度。
特点类型 | Stealth RNAi | Stealth RNAi siRNA | Silencer Select siRNA |
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经济高效的 | 极佳的抑制效果,低脱靶效应 | 优秀的抑制效果,较低的脱靶效应 | |
效价 | 20nM推荐浓度 | 20nM推荐浓度 | 5nM推荐浓度 |
高效(抑制率>70%) | 保证3条siRNA中的2条 | 保证3条siRNA中的2条 | 保证2条siRNA中的2条 |
特异性 | 中等 | 高 | 很高 |
覆盖 | 编码RNA | 编码RNA | 编码和非编码RNA |
目标种展 | 人、小鼠、大鼠 ( 其他种属使用定制工具) | 人、小鼠、大鼠 ( 其他种属使用定制工具) | 人、小鼠、大鼠 ( 其他种属使用定制工具) |
推荐产品 | Silencer Pre-designed siRNA, 5 nmol ( 货号. No. AM16708) | Stealth RNAi siRNA, tube ( 货号. No. 1299001) | Silencer Select Pre-designed siRNA, 5 nmol ( 货号. No. 4390771) |
可供选择的miRNA 文库提供Invitrogen™ mir Vana™ miRNA 模拟物和抑制剂是化学修饰的合成核酸,可 用于模拟成熟miRNA,或者结合并抑制内源性miRNA 选择。
作为合作伙伴,我们从始至终与您通力合作,帮助您加速研究,并提供定时文库服务。
将CRISPR-Cas9 技术应用于高通量筛选,利用质量控制优化分析设计,高质量的对照是成功筛选的关键。 赛默飞提供阴性对照、阳性对照、导入对照,其靶向基因编辑原理见下图。
LentiArray CRISPR 文库是在慢病毒表达载体中构建的gRNA 阵列文库,它提供了一种强效的导入方法, 使您可以在各种细胞类型中进行高通量筛选。
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预定义和定制文库使您可以重点研究确定的基因组,或者进行更广泛的筛选。我们可提供miRNA、 siRNA、gRNA 和慢病毒形式的文库。
在基因编辑研究基因功能时,我们希望提高编辑的效率, 但同时也要保证不会在基因组的其他部位导致改 变,除了前期提高对设计筛选的质量外,后期也要提高对基因编辑效率的检测技术,以便高效地对候选 靶点进行验证,快速高效地确定功能靶点,因此针对基因编辑技术,我们可以提供配套的快速、高质量 基因编辑表型分析系统服务。
CRISPR 编辑的起点是健康的细胞。在编辑前先进行 细胞健康分析可以作为严格的质控步骤,避免浪费时 间和试剂。
抗生素筛选、基因表达和免疫细胞化学分析常用于监 测CRISPR 组分的组装,利用抗生素筛选鉴别转染细 胞时,可采用存活率分析监测筛选,方便的筛选方 法是使用显微镜。
免疫细胞化学是鉴别细胞中特定蛋白质的标准技术。 使用抗Cas-9 一抗和标记二抗,利用荧光成像可检测 细胞中的Cas-9 表达。
CRISPR-Cas9 系统常用于基因敲除、基因嵌入或基因 表达调控。免疫细胞化学提供了一种监测生物学相关 系统中特定蛋白调控的方法。在有特定的抗体可用的 情况下,成像提供了一种相对简单且高质量的方法, 在细胞水平上探索蛋白质的表达。
高内涵细胞定量成像分析系统,综合了自动化高通量显微成像和大数据定量分析,在一次实验中同时获 得细胞( 组织或生物体) 明场或荧光显微成像、多重靶标分子表达量、时间和空间信息、细胞及亚细胞形 态结构信息。在生物制药中(例如抗体药物筛选),高内涵筛选也可以提高筛选效率。
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Thermo Scientific™ CellInsight™ 高内涵筛选系统被广泛应用在药物筛选领域,涉及肿瘤癌症、心血管 疾病、免疫疾病、代谢疾病、神经退行性疾病。同时在生物制药中(例如抗体药物筛选),高内涵筛选 也可以提高筛选效率。从高通量细胞成像到定量表型分析,进而对相关生物学信息挖掘,一键式提供抗 体药效、细胞毒性等评价信息。
血管生成
细胞凋亡-TUNEL
细胞自噬
轴突生长
细胞凋亡 -Caspase 检测
突触生成
细胞活力
细胞增殖
细胞骨架重排
细胞内吞
细胞周期和
有丝分裂指数
干细胞分化
线粒体健康
转录因子激活
氧应激
我们提供的荧光定量PCR 平台技术不仅可以用于生物制药研发过程中对靶点的筛选,还可以在靶点验证 过程中对候选靶点引起的基因表达标志物的检测,使用方便、灵敏度、高,且能够在不同实验室中进行 标准化,从而获得一致可靠的结果。
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StepOne/StepOne Plus 系统
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7300 系统
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7500/7500 Fast 系统
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7900HT Fast 系统
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Quantstudio 7 系统
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QuantStudio 12K Flex 系统
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荧光通道
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3/4
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4
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5
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激光光源, 500-660nm 连续 波长检测
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6 色通道
(21 种荧光组合) |
6 色通道
(21 种荧光组合) |
支持模块
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48/96 孔
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96孔
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96 孔/ 快速96 孔
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96 孔、快速96 孔、 384 孔&TaqMan Array 芯片
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96 孔、快速96 孔、 384 孔&TaqMan Array 芯片
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96 孔、快速96 孔、384 孔 &TaqMan Array 芯片&3072 通 孔OpenArray 芯片
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如果以上商品化Panel 不能满足客户的要求,基于OpenArray 灵活方便的“ 样本/ 检测位点数” 格式, 赛默飞提供2700 多种独特的 Taqman Drug Metabolism Assay (Taqman DME Assay) 及丰富的SNP Genotyping Assay 和Copy Number Assay 供客户选择,以定制满足需求的个性化Panel。
可用于Genotyping 和表达分析的
Genotyping/CopyOpenArray 格式
Genotypinc 检测 | |
位点数
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样品数
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12
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144
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26
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96
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60
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48
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120
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24
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180
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16
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240
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12
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表达分析检测 | |
位点数
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样品数
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18(3x)
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48
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56
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48
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112
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21
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120
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24
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168
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16
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224
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12
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TaqMan SNP Number Assay
TaqMan SNP Genotyping/Copy Number Assay
620 万 TaqMan® SNP Genotyping Assays
160 万 TaqMan® Copy Number Assays
客户定制 TaqMan® Assay
如果实验室已有常规荧光定量PCR 设备,可以按照需求订购以上TaqMan DME Assay、SNP Genotyping Assay 及Copy Number Assay,进行药物基因组学靶点的检测,操作与其他定量PCR 检测一样简单。
在药物靶点验证阶段,流式细胞术对靶点下游功能的验证起到了重要的作用。应用流式细胞术对候选靶点可能引起的细胞生理病理变化进行检测,把那些能够引起明显细胞反应变化的候选靶点作为重点研究对象,结合前面介绍的多种验证手段综合评估。针对流式细胞技术,我们专为实现高效能结果、节约实验室时间而设计,以此为细胞及其功能分析提供全方位解决方案。
全新的台式流式分析仪,采用创新的声波聚焦技术,灵活配置,高达4 激光14 色系统。
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前期通过筛选和下游功能实验初步验证的候选靶点,我们希望能通过靶点的结构生物研究来了解作为在 生物制药研发过程中的靶点,能够引起生物体反应的具体分子机理是怎样的?结构决定功能,蛋白功能 的实现是通过具体结构参与到信号通路中起作用,引起细胞生理病理变化的,所以对蛋白结构的正确分 析是决定其能否作为药靶的关键所在,针对蛋白分子生物学研究,我们可以提供一整套完整的蛋白表达 解决方案,帮助企业和实验室展开研究。
在进行蛋白结构与功能以及作用机制时,正确的基因序列以及表达阅读框是保证研究成功基础的部分。 从限制酶到基因合成,我们可提供各种工具和资源,帮助您获得高质量的克隆DNA,同时也提供了定制 基因合成服务来优化克隆和表达。
限制酶克隆
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TOPO克隆
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Gateway克隆
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GeneAr无缝克隆
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GeneArt 第二型限制酶组装试剂盒
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GeneArt Strings DNA片段
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GeneArt基因合成
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主要优点
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• 灵活且经济
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• >95% 效率,5 分钟PCR克隆
• 适用于其他多种克隆系统 |
• 在多种表达系统中进行 ORF 穿梭
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• ≤4 个片段( 共达40kb) 的无缝定向克隆
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• ≤8 个片段( 达20 kb) 的无缝定向克隆
• 针对极小的重复序列十分高效 |
• 合成的线性DNA 片段可用于克隆( 采用您选择的方法)
• 经过序列验证 |
• 在载体中自定义克隆基因
• 经过序列验证 • 可以优化以实现很高的表达 |
技术基础知识
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• 限制性酶切和连接
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• 基于拓补异构酶的克,无需连接酶
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• 一步法,实现定向且位点特异性DNA重组
• 无需限制酶和连接酶 |
• 使用重叠序列进行末端同源性重组
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• 在一个反应中完成第二型限制性酶切和连接
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• 从合成寡核苷酸组装而成
• 150–3,000bp,还可提供随机碱基的文库形式 |
目的DNA 克隆至载体内
• 100% 序列验证,且带有质量保证文件 |
需要DNA 原材料( 质粒中的基因、文库等)
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√
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√
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√
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√
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√
| ||
使用自选载体
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√
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*
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√
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√
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√
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√
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* 载体需要采用Gateway 载体转换系统和One Shot ccdB Survival 细胞进行转换。
通过重组蛋白表达技术可以帮助靶点蛋白结构正确的表达,以便研究蛋白质结构和功能。选择合适的蛋 白表达系统, 以保证不同实验对蛋白结构不同的需求。
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昆虫细胞可提供高蛋白表达水平,带有适当的翻译后修饰,易于放大且细胞生长条件简单,可方便地转 换为高密度悬浮培养,从而用于大规模的蛋白表达。杆状病毒表达系统功能强大、用途多样,可用于在 昆虫细胞中高水平表达重组蛋白。
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Gibco™ ExpiSf™ 是首个化学成分确定的昆虫蛋白表达系统,可实现一致的细胞生长和蛋白表达,彻底告别波动的结果。 蛋白产量远超传统的昆虫表达平台,且所需时间更短。其适用于从开发到生产的各种 规模,可实现相同体积得率,是发现新疗法的理想系统。
Expi293™ 表达系统是瞬时表达技术的一次巨大进步,可在哺乳动物细胞中实现快速且超高产量的蛋白生 产, 高效表达正确折叠的活性蛋白, 特别适合于结构生物学研究。
Expi293™ 表达系统还可与MembranePro™ 技术相结合,膜蛋白产量增长 > 20 倍
Gibco™ ExpiCHO™ 哺乳动物瞬时表达系统在CHO 细胞的重组蛋白瞬时生成方面带来了革命性的飞跃。 这款已经过全面优化的系统可以获得高达3 克/ 升的蛋白产量,可使您在药物研发过程的早期快速且经济 地获得CHO 表达的蛋白,为您提供了很高的可信度,瞬时表达的候选药物将模拟在CHO 中生产的下游 生物治疗药物。
该表达系统将高表达的CHO 细胞系、化学成分确定的无动物 源性培养基、优化的培养辅料及高效转染试剂相结合,滴度较 Gibco FreeStyle CHO 表达系统高160 倍, 较Gibco Expi293 表达系统高3 倍,人IgG 表达水平可达3g/L。 |
ExpiCHO 表达系统提供了简单且灵活的实验方案,可以在蛋白 产量、速度和规模上实现完美的平衡,满足您特定的需要或应 用要求。 |
基因工程表达的蛋白,由于蛋白质的异质性,没有一种方法或试剂能适用于所有蛋白质的分离和纯化。 蛋白分析的第一步是细胞抽提。裂解完成后,抽提所得蛋白可能需要进一步纯化 ( 采用诸如透析、脱盐或 浓缩等技术),也可以通过免疫沉淀或亲和纯化进行目的蛋白的富集或完全分离,具体取决于工作流程的 后续步骤。
特点:配方温和,可很大程度地提高蛋白产量和活性
易于操作的装置、透析卡和透析瓶,实现安全的样品处理
方便的离心柱和离心多孔板形式,帮助确保快速脱盐和高蛋白回收率
特点
易于使用的装置,可实现快速高效的浓缩
特点
蛋白结构生物学的上游工作只是为了拿到正确表达产物的基础,克隆与表达的关键是要拿到纯的表达产 物,研究其生物学功能。相对与上游工作来说,分子克隆的下游蛋白纯化工作非常复杂,除了要保证纯度外, 还必须保持其生物学活性,重复性要好,所以这就要求要选择应用适应性非常强的方法去纯化蛋白。
离子交换纯化
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抗体纯化
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融化蛋白质纯化
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生物素亲和纯化
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蛋白质固定
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纯化程度
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中到高(取决于具体应用)
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高
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高
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高
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高
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可选的配体或化学试剂
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强阴离子交换(SAX)、强阳离子交换(SCX)
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Protein A,Protein G,Protein A/G,Protein L,Melon™ 凝胶
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Ni-NTA,钴,谷胱甘肽,Anti-c-Myc,Anti-HA,Anti-Flay
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亲和素,链霉亲和素NeutrAvidin™ 中性亲和素,单体亲和素
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与氨基、巯基、羰基、羧酸以及其它基团反应的活化基质
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可选填料类型
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POROS 树脂
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琼脂糖、磁珠、POROS 树脂磁性琼脂糖
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琼脂糖、Superflow琼脂糖、磁珠、磁性琼脂糖
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琼脂糖、磁珠
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琼脂糖、磁珠
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包装规格
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散装树脂
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散装树脂或微珠、离心柱和试剂盒、色谱滤芯、96 孔离心板
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散装树脂或微珠、离心柱和试剂盒、色谱滤芯、96 孔离心板
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散装树脂或微珠、离心柱和试剂盒、色谱滤芯、96孔离心板
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散装树脂或微珠、干粉、离心柱和试剂盒
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选择情况
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磁珠的表面包被
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需要的配体类型
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质谱兼容性
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非特异性结合
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IP 实验方案耗时
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主要优点
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产品
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蛋白特异的抗体
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蛋白 A、G 或 L
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大多数种属的一抗。蛋白 A、G 和L 结合不同的抗体种属和亚类,特异性不同。
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否
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低
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Dynabeads:<40 分钟Pierce 磁珠:130–180分钟
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Dynabeads —— 快速、简单的实验方案,非特异性结合水平较低、产量和可重复性较高
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Dynabeads 蛋白 A
Dynabeads 蛋白 G Dynabeads 蛋白 A 免疫沉淀试剂盒 Dynabeads 蛋白 G 免疫沉淀试剂盒 Pierce 蛋白A/G 经典免疫沉淀试剂盒 Pierce 蛋白A/G 交联法免疫沉淀试剂盒 Pierce 蛋白 A/G 磁珠 Pierce 蛋白 L 磁珠 |
二抗
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小鼠 IgG 或兔 IgG
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否†
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低
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Dynabeads:<40 分钟
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• 快速简单的实验方案
• 低非特异性结合 • 小鼠或兔 IgG 的特异性 结合 |
Dynabeads M-280 山羊抗小鼠 IgG
Dynabeads M-280 山羊抗兔IgG | |
环氧树脂 活化的 磁珠
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任意蛋白质配体( 如抗体、肽)
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是
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超低
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Dynabeads:抗体结合时间:过夜;Co-IP 实验方案时间:30–40 分钟
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• 抗体的共价结合可实现超低的非特异性结合
• 无需交联 • 针对较大的蛋白质复合实现温和高效的Co-IP |
Dynabeads 抗体偶联试剂盒
Pierce 免疫共沉淀试剂盒 | |
生物素化的抗体
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链霉亲和素
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任意生物素化的抗体或配体
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是
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低
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30–40 分钟
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• 结合任意生物素化蛋白
• 适用于可溶性 IgG 含量高的样本 • 可结合缺乏 Fc 区域的重组抗体 |
Dynabeads M-280 链霉亲和素
Dynabeads M-270 链霉亲和素 Dynabeads MyOne 链霉亲和素 C1 Dynabeads MyOne 链霉亲和素 T1 Pierce 链霉亲和素磁珠 |
重组蛋白
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融合标签
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不同磁珠结合具有下列标签的蛋白质(His、GST、HA、cmyc、Flag)
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是
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低
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• 纯化具有同标签的许多不同的蛋白质
• 无需抗体 |
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对细胞裂解物或纯化的蛋白质进行分析,以确认产量或将多个样本标准化从而进行平行比较。除免疫沉 淀、凝胶电泳和蛋白质免疫印迹技术外,还可以采用各种分析方法定量蛋白质或进一步鉴定蛋白质性质, 包括 ELISA、Luminex 分析、蛋白质芯片、酶和蛋白质活性分析、报告基因分析和蛋白质相互作用分析。
引用广泛的产品,适用于单重分析或多重分析的蛋白质定量
Invitrogen™ 多重分析产品采用 Luminex™ x MAP™ ( 多靶点检测) 技术,可在单个孔内实现快速高效的 多种蛋白质分析。当样品量有限时,这一点非常关键。重要的是,进行多重分析,您能够对珍贵样品 进行更全面的蛋白信号转导研究。
特点
质谱 (MS) 是一种功能强大的分析工具,用于蛋白质组学研究和药物开发。MS 可以通过显示化合物的结 构和化学特性,鉴别并定量已知和未知的化合物。由于样品抽提和制备的质量和可重复性对质谱仪的分 离及鉴定性能影响很大,因此用于 MS 分析的样品制备是否得当,是蛋白质组学工作流程的关键步骤。
Invitrogen iBright 智能成像系统CL1000 和FL1000, 主要应用于生命科学领域的蛋白质研究,可以轻松、高 效实现化学发光Western blot 印迹、荧光印迹、蛋白 凝胶、核酸凝胶成像以及数据分析。
全球抗体药物市场增长强劲,被业内认为是生物制药产业中最为活跃的组成部分,已成为未来生物医 药领域发展的“潜力股”。随着国家医药生物产业规划升级的推动,中国抗体药将迎来新的发展机遇期。
抗体药前期研发的核心是文库筛选,获得高特异性、高亲和力单克隆抗体。主流文库筛选有两大技术 平台:噬菌体/ 酵母展示文库筛选和杂交瘤细胞筛选。
文库筛选又称Biopanning,通过“ 结合- 清洗- 洗脱- 扩增” 多轮循环操作,筛选出特异性强,亲和力高的 单克隆抗体。传统筛选多基于96 微孔板,步骤繁琐, 结果一致性差。
Kingfisher Flex 磁珠纯化系统是新一代自动化噬菌体文 库筛选平台,将手动筛选过程实现自动化。
DynabeadsTM 磁珠是超顺磁性、大小一致、表面均一的聚合物磁珠,适用 于各种生物反应分子的吸附和耦合, 可用于于分离生物材料 (细胞、蛋白 质、核酸等),保证实验批次之间的高重复性。
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杂交瘤细胞筛选关键是杂交瘤细胞的单克隆化,经典方法是采用有限稀释法,形成单细胞克隆,通过 ELISA 检测培养基上清效价,确定阳性克隆。传统细胞分液,尤其是对于杂交瘤细胞单克隆化借助于移液 器进行微孔板分液,效率低、一致性差。采用 Multidrop Combi 自动分液系统可以实现快速、自动化分液, 提高分液效率与一致性。
Multidrop Combi 微孔板自动分液器可以实现快速的细胞分液。10 秒钟即可自动完成一块96 孔板 每孔100μL 的细胞分液,整个过程自动化、快速、一致性高。
快速自动细胞分液及培养系统
Multidrop Combi 自动分液器
Cytomat 培养箱是基于贺利氏技术的自动化培养箱, 使用Cytomat 48C 可以将通量提高到1008 块标准 板,实现细胞培养的自动化和标准化。
整个抗体筛选流程中ELISA 检测通量非常大,整合Orbitor 机械臂、Wellwash Versa 洗板机、Multidrop Combi 分液器及酶标仪的自动化ELISA 检测系统,可实现自动化高通量的ELISA 检测。多功能酶标 仪Varioskan LUX, 作为通用检测平台,可进行包括光吸收、荧光、化学发光、时间分辨荧光、HTRF、 FRET、Alpha 等多种方式检测。
高通量ELISA检测系统
Varioskan LUX检测平台
抗体蛋白热稳定性是一个重要检测指标。借助Protein thermal shift 分析技术通过Tm 值的变化可以直观 判定抗体蛋白的热稳定性。QuantStudio™ 7 Flex 实时荧光定量PCR 系统及其配套的Protein Thermal Shift 试剂及软件可以很好的检测抗体蛋白Tm 值的变化,以及促进蛋白稳定性的缓冲液条件的优化。
QuantStudio™ 7 Flex 实时荧光定量 PCR 系统,可获得高分辨率熔解曲线,并且具有速度快、通量高、 定量准、重复性好等特点。
整个抗体筛选流程中ELISA 检测通量非常大,整合Orbitor 机械臂、Wellwash Versa 洗板机、Multidrop Combi 分液器及酶标仪的自动化ELISA 检测系统,可实现自动化高通量的ELISA 检测。多功能酶标 仪Varioskan LUX, 作为通用检测平台,可进行包括光吸收、荧光、化学发光、时间分辨荧光、HTRF、 FRET、Alpha 等多种方式检测。
高通量ELISA检测系统
Varioskan LUX检测平台
抗体蛋白热稳定性是一个重要检测指标。借助Protein thermal shift 分析技术通过Tm 值的变化可以直观 判定抗体蛋白的热稳定性。QuantStudio™ 7 Flex 实时荧光定量PCR 系统及其配套的Protein Thermal Shift 试剂及软件可以很好的检测抗体蛋白Tm 值的变化,以及促进蛋白稳定性的缓冲液条件的优化。
QuantStudio 7 FLEX 荧光定量PCR 仪
抗体蛋白Tm 值确定
QuantStudio™ 7 Flex 实时荧光定量 PCR 系统,可获得高分辨率熔解曲线,并且具有速度快、通量高、 定量准、重复性好等特点。
在生物制药研发过程中,新型药物的设计和筛选都是通过已知的药物靶点来完成的,因此对药物靶点的筛选就成为药物开发过程中的分析系统和常规PCR 系统,对靶点筛选中常用的SNP、CNV、基因突变、 融合、插入和缺失进行检测,尤其芯片技术结合高通量测序技术还可以高效快速地对大样本进行检测, 大大节约了靶点筛选的时间和成本。还可以运用质谱技术对代谢组学和蛋白组学中相关基因的表达差异 性直接进行筛选,直接作为候选靶点研究。
全自动化减少人为因素造成的差异性,省时省力
测序和片段分析的金标准
可扩展性、简便性和测序速度,适合于每一个实验室
Ion Torrent™ 个人化操作基因组测序仪(PGM™),设计配合 革新性的半导体芯片技术,使整个平台具有极高的扩展性和 快速完成测序的性能。
简单、重复性好、全自动的模板制备和芯片上样
Ion Chef™ 系统简化了Ion Proton™ 和Ion PGM™ 系 统的流程,为模板制备和芯片上样提供了一个全自动 的高通量解决方案。
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3500 系列仪器优势
miRNA 模拟物和抑制剂文库
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Silencer Select siRNA 文库
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LentiPool CRISPR 文库
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LentiArray CRISPR 文库
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简介
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化学修饰的合成核酸,可用于 模拟成熟miRNA,或者结合并 抑制内源
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超强siRNA 敲除基因表达
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慢病毒表达载体中的 gRNA 混合文库,提供 了强效的导入方法,可 以在同一试管内实现完 全的基因敲除
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慢病毒表达载体中的gRNA 阵列文库,提供了强效的导 入方法,可以在同一试管内 实现完全的基因敲除
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RNA 类型
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miRNA 寡核苷酸
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siRNA 寡核苷酸
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全长gRNA
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全长gRNA
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作用机制
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内源性RNA 诱导沉默复合体 (RISC)
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内源性RNA 诱导沉默复合 体 (RISC)
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Cas9 核酸内切酶介导 的插入缺失形成
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Cas9 核酸内切酶介导的插入 缺失形成
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对基因表达的影响
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瞬时抑制
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瞬时抑制
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永久且完全的基因敲除
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永久且完全的基因敲除
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作用时间
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2-3天
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2-3天
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2-4天
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种属
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人、小鼠、大鼠
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人、小鼠、大鼠
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人
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人
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形式
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阵列或混合
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阵列或混合
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混合、即用型慢病毒
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阵列、即用型慢病毒或含有 慢病毒载体的细菌甘油储液
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适合体外RNAi 应用的超强siRNA 可以高效敲除基因表达,是研究各种细胞类型中蛋白质功能的很好的途径。 Invitrogen™ Silencer ™ 和Silencer ™ Select siRNA 文库,提供融合了siRNA 设计、脱靶效应预测算法 和化学修饰方面最新进展研究,可改善链偏差,加快各种基因类别的功能基因组筛选,且可保证获得的 高准确度和高精度。
特点类型 | Stealth RNAi | Stealth RNAi siRNA | Silencer Select siRNA |
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经济高效的 | 极佳的抑制效果,低脱靶效应 | 优秀的抑制效果,较低的脱靶效应 | |
效价 | 20nM推荐浓度 | 20nM推荐浓度 | 5nM推荐浓度 |
高效(抑制率>70%) | 保证3条siRNA中的2条 | 保证3条siRNA中的2条 | 保证2条siRNA中的2条 |
特异性 | 中等 | 高 | 很高 |
覆盖 | 编码RNA | 编码RNA | 编码和非编码RNA |
目标种展 | 人、小鼠、大鼠 ( 其他种属使用定制工具) | 人、小鼠、大鼠 ( 其他种属使用定制工具) | 人、小鼠、大鼠 ( 其他种属使用定制工具) |
推荐产品 | Silencer Pre-designed siRNA, 5 nmol ( 货号. No. AM16708) | Stealth RNAi siRNA, tube ( 货号. No. 1299001) | Silencer Select Pre-designed siRNA, 5 nmol ( 货号. No. 4390771) |
可供选择的miRNA 文库提供Invitrogen™ mir Vana™ miRNA 模拟物和抑制剂是化学修饰的合成核酸,可 用于模拟成熟miRNA,或者结合并抑制内源性miRNA 选择。
作为合作伙伴,我们从始至终与您通力合作,帮助您加速研究,并提供定时文库服务。
将CRISPR-Cas9 技术应用于高通量筛选,利用质量控制优化分析设计,高质量的对照是成功筛选的关键。 赛默飞提供阴性对照、阳性对照、导入对照,其靶向基因编辑原理见下图。
LentiArray CRISPR 文库是在慢病毒表达载体中构建的gRNA 阵列文库,它提供了一种强效的导入方法, 使您可以在各种细胞类型中进行高通量筛选。
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预定义和定制文库使您可以重点研究确定的基因组,或者进行更广泛的筛选。我们可提供miRNA、 siRNA、gRNA 和慢病毒形式的文库。
在基因编辑研究基因功能时,我们希望提高编辑的效率, 但同时也要保证不会在基因组的其他部位导致改 变,除了前期提高对设计筛选的质量外,后期也要提高对基因编辑效率的检测技术,以便高效地对候选 靶点进行验证,快速高效地确定功能靶点,因此针对基因编辑技术,我们可以提供配套的快速、高质量 基因编辑表型分析系统服务。
CRISPR 编辑的起点是健康的细胞。在编辑前先进行 细胞健康分析可以作为严格的质控步骤,避免浪费时 间和试剂。
抗生素筛选、基因表达和免疫细胞化学分析常用于监 测CRISPR 组分的组装,利用抗生素筛选鉴别转染细 胞时,可采用存活率分析监测筛选,方便的筛选方 法是使用显微镜。
免疫细胞化学是鉴别细胞中特定蛋白质的标准技术。 使用抗Cas-9 一抗和标记二抗,利用荧光成像可检测 细胞中的Cas-9 表达。
CRISPR-Cas9 系统常用于基因敲除、基因嵌入或基因 表达调控。免疫细胞化学提供了一种监测生物学相关 系统中特定蛋白调控的方法。在有特定的抗体可用的 情况下,成像提供了一种相对简单且高质量的方法, 在细胞水平上探索蛋白质的表达。
高内涵细胞定量成像分析系统,综合了自动化高通量显微成像和大数据定量分析,在一次实验中同时获 得细胞( 组织或生物体) 明场或荧光显微成像、多重靶标分子表达量、时间和空间信息、细胞及亚细胞形 态结构信息。在生物制药中(例如抗体药物筛选),高内涵筛选也可以提高筛选效率。
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Thermo Scientific™ CellInsight™ 高内涵筛选系统被广泛应用在药物筛选领域,涉及肿瘤癌症、心血管 疾病、免疫疾病、代谢疾病、神经退行性疾病。同时在生物制药中(例如抗体药物筛选),高内涵筛选 也可以提高筛选效率。从高通量细胞成像到定量表型分析,进而对相关生物学信息挖掘,一键式提供抗 体药效、细胞毒性等评价信息。
血管生成
细胞凋亡-TUNEL
细胞自噬
轴突生长
细胞凋亡 -Caspase 检测
突触生成
细胞活力
细胞增殖
细胞骨架重排
细胞内吞
细胞周期和
有丝分裂指数
干细胞分化
线粒体健康
转录因子激活
氧应激
我们提供的荧光定量PCR 平台技术不仅可以用于生物制药研发过程中对靶点的筛选,还可以在靶点验证 过程中对候选靶点引起的基因表达标志物的检测,使用方便、灵敏度、高,且能够在不同实验室中进行 标准化,从而获得一致可靠的结果。
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StepOne/StepOne Plus 系统
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7300 系统
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7500/7500 Fast 系统
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7900HT Fast 系统
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Quantstudio 7 系统
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QuantStudio 12K Flex 系统
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荧光通道
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3/4
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4
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5
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激光光源, 500-660nm 连续 波长检测
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6 色通道
(21 种荧光组合) |
6 色通道
(21 种荧光组合) |
支持模块
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48/96 孔
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96孔
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96 孔/ 快速96 孔
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96 孔、快速96 孔、 384 孔&TaqMan Array 芯片
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96 孔、快速96 孔、 384 孔&TaqMan Array 芯片
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96 孔、快速96 孔、384 孔 &TaqMan Array 芯片&3072 通 孔OpenArray 芯片
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如果以上商品化Panel 不能满足客户的要求,基于OpenArray 灵活方便的“ 样本/ 检测位点数” 格式, 赛默飞提供2700 多种独特的 Taqman Drug Metabolism Assay (Taqman DME Assay) 及丰富的SNP Genotyping Assay 和Copy Number Assay 供客户选择,以定制满足需求的个性化Panel。
可用于Genotyping 和表达分析的
Genotyping/CopyOpenArray 格式
Genotypinc 检测 | |
位点数
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样品数
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12
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144
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26
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96
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60
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48
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120
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24
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180
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16
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240
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12
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表达分析检测 | |
位点数
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样品数
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18(3x)
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48
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56
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48
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112
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21
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120
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24
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168
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16
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224
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12
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TaqMan SNP Number Assay
TaqMan SNP Genotyping/Copy Number Assay
620 万 TaqMan® SNP Genotyping Assays
160 万 TaqMan® Copy Number Assays
客户定制 TaqMan® Assay
如果实验室已有常规荧光定量PCR 设备,可以按照需求订购以上TaqMan DME Assay、SNP Genotyping Assay 及Copy Number Assay,进行药物基因组学靶点的检测,操作与其他定量PCR 检测一样简单。
在药物靶点验证阶段,流式细胞术对靶点下游功能的验证起到了重要的作用。应用流式细胞术对候选靶点可能引起的细胞生理病理变化进行检测,把那些能够引起明显细胞反应变化的候选靶点作为重点研究对象,结合前面介绍的多种验证手段综合评估。针对流式细胞技术,我们专为实现高效能结果、节约实验室时间而设计,以此为细胞及其功能分析提供全方位解决方案。
全新的台式流式分析仪,采用创新的声波聚焦技术,灵活配置,高达4 激光14 色系统。
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前期通过筛选和下游功能实验初步验证的候选靶点,我们希望能通过靶点的结构生物研究来了解作为在 生物制药研发过程中的靶点,能够引起生物体反应的具体分子机理是怎样的?结构决定功能,蛋白功能 的实现是通过具体结构参与到信号通路中起作用,引起细胞生理病理变化的,所以对蛋白结构的正确分 析是决定其能否作为药靶的关键所在,针对蛋白分子生物学研究,我们可以提供一整套完整的蛋白表达 解决方案,帮助企业和实验室展开研究。
在进行蛋白结构与功能以及作用机制时,正确的基因序列以及表达阅读框是保证研究成功基础的部分。 从限制酶到基因合成,我们可提供各种工具和资源,帮助您获得高质量的克隆DNA,同时也提供了定制 基因合成服务来优化克隆和表达。
限制酶克隆
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TOPO克隆
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Gateway克隆
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GeneAr无缝克隆
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GeneArt 第二型限制酶组装试剂盒
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GeneArt Strings DNA片段
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GeneArt基因合成
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主要优点
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• 灵活且经济
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• >95% 效率,5 分钟PCR克隆
• 适用于其他多种克隆系统 |
• 在多种表达系统中进行 ORF 穿梭
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• ≤4 个片段( 共达40kb) 的无缝定向克隆
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• ≤8 个片段( 达20 kb) 的无缝定向克隆
• 针对极小的重复序列十分高效 |
• 合成的线性DNA 片段可用于克隆( 采用您选择的方法)
• 经过序列验证 |
• 在载体中自定义克隆基因
• 经过序列验证 • 可以优化以实现很高的表达 |
技术基础知识
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• 限制性酶切和连接
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• 基于拓补异构酶的克,无需连接酶
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• 一步法,实现定向且位点特异性DNA重组
• 无需限制酶和连接酶 |
• 使用重叠序列进行末端同源性重组
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• 在一个反应中完成第二型限制性酶切和连接
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• 从合成寡核苷酸组装而成
• 150–3,000bp,还可提供随机碱基的文库形式 |
目的DNA 克隆至载体内
• 100% 序列验证,且带有质量保证文件 |
需要DNA 原材料( 质粒中的基因、文库等)
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√
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√
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√
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√
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√
| ||
使用自选载体
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√
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*
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√
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√
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√
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√
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* 载体需要采用Gateway 载体转换系统和One Shot ccdB Survival 细胞进行转换。
通过重组蛋白表达技术可以帮助靶点蛋白结构正确的表达,以便研究蛋白质结构和功能。选择合适的蛋 白表达系统, 以保证不同实验对蛋白结构不同的需求。
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昆虫细胞可提供高蛋白表达水平,带有适当的翻译后修饰,易于放大且细胞生长条件简单,可方便地转 换为高密度悬浮培养,从而用于大规模的蛋白表达。杆状病毒表达系统功能强大、用途多样,可用于在 昆虫细胞中高水平表达重组蛋白。
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Gibco™ ExpiSf™ 是首个化学成分确定的昆虫蛋白表达系统,可实现一致的细胞生长和蛋白表达,彻底告别波动的结果。 蛋白产量远超传统的昆虫表达平台,且所需时间更短。其适用于从开发到生产的各种 规模,可实现相同体积得率,是发现新疗法的理想系统。
Expi293™ 表达系统是瞬时表达技术的一次巨大进步,可在哺乳动物细胞中实现快速且超高产量的蛋白生 产, 高效表达正确折叠的活性蛋白, 特别适合于结构生物学研究。
Expi293™ 表达系统还可与MembranePro™ 技术相结合,膜蛋白产量增长 > 20 倍
Gibco™ ExpiCHO™ 哺乳动物瞬时表达系统在CHO 细胞的重组蛋白瞬时生成方面带来了革命性的飞跃。 这款已经过全面优化的系统可以获得高达3 克/ 升的蛋白产量,可使您在药物研发过程的早期快速且经济 地获得CHO 表达的蛋白,为您提供了很高的可信度,瞬时表达的候选药物将模拟在CHO 中生产的下游 生物治疗药物。
该表达系统将高表达的CHO 细胞系、化学成分确定的无动物 源性培养基、优化的培养辅料及高效转染试剂相结合,滴度较 Gibco FreeStyle CHO 表达系统高160 倍, 较Gibco Expi293 表达系统高3 倍,人IgG 表达水平可达3g/L。 |
ExpiCHO 表达系统提供了简单且灵活的实验方案,可以在蛋白 产量、速度和规模上实现完美的平衡,满足您特定的需要或应 用要求。 |
基因工程表达的蛋白,由于蛋白质的异质性,没有一种方法或试剂能适用于所有蛋白质的分离和纯化。 蛋白分析的第一步是细胞抽提。裂解完成后,抽提所得蛋白可能需要进一步纯化 ( 采用诸如透析、脱盐或 浓缩等技术),也可以通过免疫沉淀或亲和纯化进行目的蛋白的富集或完全分离,具体取决于工作流程的 后续步骤。
特点:配方温和,可很大程度地提高蛋白产量和活性
易于操作的装置、透析卡和透析瓶,实现安全的样品处理
方便的离心柱和离心多孔板形式,帮助确保快速脱盐和高蛋白回收率
特点
易于使用的装置,可实现快速高效的浓缩
特点
蛋白结构生物学的上游工作只是为了拿到正确表达产物的基础,克隆与表达的关键是要拿到纯的表达产 物,研究其生物学功能。相对与上游工作来说,分子克隆的下游蛋白纯化工作非常复杂,除了要保证纯度外, 还必须保持其生物学活性,重复性要好,所以这就要求要选择应用适应性非常强的方法去纯化蛋白。
离子交换纯化
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抗体纯化
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融化蛋白质纯化
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生物素亲和纯化
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蛋白质固定
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纯化程度
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中到高(取决于具体应用)
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高
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高
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高
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高
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可选的配体或化学试剂
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强阴离子交换(SAX)、强阳离子交换(SCX)
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Protein A,Protein G,Protein A/G,Protein L,Melon™ 凝胶
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Ni-NTA,钴,谷胱甘肽,Anti-c-Myc,Anti-HA,Anti-Flay
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亲和素,链霉亲和素NeutrAvidin™ 中性亲和素,单体亲和素
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与氨基、巯基、羰基、羧酸以及其它基团反应的活化基质
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可选填料类型
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POROS 树脂
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琼脂糖、磁珠、POROS 树脂磁性琼脂糖
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琼脂糖、Superflow琼脂糖、磁珠、磁性琼脂糖
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琼脂糖、磁珠
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琼脂糖、磁珠
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包装规格
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散装树脂
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散装树脂或微珠、离心柱和试剂盒、色谱滤芯、96 孔离心板
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散装树脂或微珠、离心柱和试剂盒、色谱滤芯、96 孔离心板
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散装树脂或微珠、离心柱和试剂盒、色谱滤芯、96孔离心板
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散装树脂或微珠、干粉、离心柱和试剂盒
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选择情况
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磁珠的表面包被
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需要的配体类型
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质谱兼容性
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非特异性结合
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IP 实验方案耗时
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主要优点
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产品
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蛋白特异的抗体
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蛋白 A、G 或 L
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大多数种属的一抗。蛋白 A、G 和L 结合不同的抗体种属和亚类,特异性不同。
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否
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低
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Dynabeads:<40 分钟Pierce 磁珠:130–180分钟
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Dynabeads —— 快速、简单的实验方案,非特异性结合水平较低、产量和可重复性较高
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Dynabeads 蛋白 A
Dynabeads 蛋白 G Dynabeads 蛋白 A 免疫沉淀试剂盒 Dynabeads 蛋白 G 免疫沉淀试剂盒 Pierce 蛋白A/G 经典免疫沉淀试剂盒 Pierce 蛋白A/G 交联法免疫沉淀试剂盒 Pierce 蛋白 A/G 磁珠 Pierce 蛋白 L 磁珠 |
二抗
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小鼠 IgG 或兔 IgG
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否†
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低
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Dynabeads:<40 分钟
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• 快速简单的实验方案
• 低非特异性结合 • 小鼠或兔 IgG 的特异性 结合 |
Dynabeads M-280 山羊抗小鼠 IgG
Dynabeads M-280 山羊抗兔IgG | |
环氧树脂 活化的 磁珠
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任意蛋白质配体( 如抗体、肽)
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是
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超低
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Dynabeads:抗体结合时间:过夜;Co-IP 实验方案时间:30–40 分钟
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• 抗体的共价结合可实现超低的非特异性结合
• 无需交联 • 针对较大的蛋白质复合实现温和高效的Co-IP |
Dynabeads 抗体偶联试剂盒
Pierce 免疫共沉淀试剂盒 | |
生物素化的抗体
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链霉亲和素
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任意生物素化的抗体或配体
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是
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低
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30–40 分钟
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• 结合任意生物素化蛋白
• 适用于可溶性 IgG 含量高的样本 • 可结合缺乏 Fc 区域的重组抗体 |
Dynabeads M-280 链霉亲和素
Dynabeads M-270 链霉亲和素 Dynabeads MyOne 链霉亲和素 C1 Dynabeads MyOne 链霉亲和素 T1 Pierce 链霉亲和素磁珠 |
重组蛋白
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融合标签
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不同磁珠结合具有下列标签的蛋白质(His、GST、HA、cmyc、Flag)
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是
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低
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• 纯化具有同标签的许多不同的蛋白质
• 无需抗体 |
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对细胞裂解物或纯化的蛋白质进行分析,以确认产量或将多个样本标准化从而进行平行比较。除免疫沉 淀、凝胶电泳和蛋白质免疫印迹技术外,还可以采用各种分析方法定量蛋白质或进一步鉴定蛋白质性质, 包括 ELISA、Luminex 分析、蛋白质芯片、酶和蛋白质活性分析、报告基因分析和蛋白质相互作用分析。
引用广泛的产品,适用于单重分析或多重分析的蛋白质定量
Invitrogen™ 多重分析产品采用 Luminex™ x MAP™ ( 多靶点检测) 技术,可在单个孔内实现快速高效的 多种蛋白质分析。当样品量有限时,这一点非常关键。重要的是,进行多重分析,您能够对珍贵样品 进行更全面的蛋白信号转导研究。
特点
质谱 (MS) 是一种功能强大的分析工具,用于蛋白质组学研究和药物开发。MS 可以通过显示化合物的结 构和化学特性,鉴别并定量已知和未知的化合物。由于样品抽提和制备的质量和可重复性对质谱仪的分 离及鉴定性能影响很大,因此用于 MS 分析的样品制备是否得当,是蛋白质组学工作流程的关键步骤。
Invitrogen iBright 智能成像系统CL1000 和FL1000, 主要应用于生命科学领域的蛋白质研究,可以轻松、高 效实现化学发光Western blot 印迹、荧光印迹、蛋白 凝胶、核酸凝胶成像以及数据分析。
全球抗体药物市场增长强劲,被业内认为是生物制药产业中最为活跃的组成部分,已成为未来生物医 药领域发展的“潜力股”。随着国家医药生物产业规划升级的推动,中国抗体药将迎来新的发展机遇期。
抗体药前期研发的核心是文库筛选,获得高特异性、高亲和力单克隆抗体。主流文库筛选有两大技术 平台:噬菌体/ 酵母展示文库筛选和杂交瘤细胞筛选。
文库筛选又称Biopanning,通过“ 结合- 清洗- 洗脱- 扩增” 多轮循环操作,筛选出特异性强,亲和力高的 单克隆抗体。传统筛选多基于96 微孔板,步骤繁琐, 结果一致性差。
Kingfisher Flex 磁珠纯化系统是新一代自动化噬菌体文 库筛选平台,将手动筛选过程实现自动化。
DynabeadsTM 磁珠是超顺磁性、大小一致、表面均一的聚合物磁珠,适用 于各种生物反应分子的吸附和耦合, 可用于于分离生物材料 (细胞、蛋白 质、核酸等),保证实验批次之间的高重复性。
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杂交瘤细胞筛选关键是杂交瘤细胞的单克隆化,经典方法是采用有限稀释法,形成单细胞克隆,通过 ELISA 检测培养基上清效价,确定阳性克隆。传统细胞分液,尤其是对于杂交瘤细胞单克隆化借助于移液 器进行微孔板分液,效率低、一致性差。采用 Multidrop Combi 自动分液系统可以实现快速、自动化分液, 提高分液效率与一致性。
Multidrop Combi 微孔板自动分液器可以实现快速的细胞分液。10 秒钟即可自动完成一块96 孔板 每孔100μL 的细胞分液,整个过程自动化、快速、一致性高。
快速自动细胞分液及培养系统
Multidrop Combi 自动分液器
Cytomat 培养箱是基于贺利氏技术的自动化培养箱, 使用Cytomat 48C 可以将通量提高到1008 块标准 板,实现细胞培养的自动化和标准化。
整个抗体筛选流程中ELISA 检测通量非常大,整合Orbitor 机械臂、Wellwash Versa 洗板机、Multidrop Combi 分液器及酶标仪的自动化ELISA 检测系统,可实现自动化高通量的ELISA 检测。多功能酶标 仪Varioskan LUX, 作为通用检测平台,可进行包括光吸收、荧光、化学发光、时间分辨荧光、HTRF、 FRET、Alpha 等多种方式检测。
高通量ELISA检测系统
Varioskan LUX检测平台
抗体蛋白热稳定性是一个重要检测指标。借助Protein thermal shift 分析技术通过Tm 值的变化可以直观 判定抗体蛋白的热稳定性。QuantStudio™ 7 Flex 实时荧光定量PCR 系统及其配套的Protein Thermal Shift 试剂及软件可以很好的检测抗体蛋白Tm 值的变化,以及促进蛋白稳定性的缓冲液条件的优化。
QuantStudio™ 7 Flex 实时荧光定量 PCR 系统,可获得高分辨率熔解曲线,并且具有速度快、通量高、 定量准、重复性好等特点。
整个抗体筛选流程中ELISA 检测通量非常大,整合Orbitor 机械臂、Wellwash Versa 洗板机、Multidrop Combi 分液器及酶标仪的自动化ELISA 检测系统,可实现自动化高通量的ELISA 检测。多功能酶标 仪Varioskan LUX, 作为通用检测平台,可进行包括光吸收、荧光、化学发光、时间分辨荧光、HTRF、 FRET、Alpha 等多种方式检测。
高通量ELISA检测系统
Varioskan LUX检测平台
抗体蛋白热稳定性是一个重要检测指标。借助Protein thermal shift 分析技术通过Tm 值的变化可以直观 判定抗体蛋白的热稳定性。QuantStudio™ 7 Flex 实时荧光定量PCR 系统及其配套的Protein Thermal Shift 试剂及软件可以很好的检测抗体蛋白Tm 值的变化,以及促进蛋白稳定性的缓冲液条件的优化。
QuantStudio 7 FLEX 荧光定量PCR 仪
抗体蛋白Tm 值确定
QuantStudio™ 7 Flex 实时荧光定量 PCR 系统,可获得高分辨率熔解曲线,并且具有速度快、通量高、 定量准、重复性好等特点。